{"id":1054,"date":"2026-08-01T00:00:00","date_gmt":"2026-07-31T22:00:00","guid":{"rendered":"https:\/\/dutchpeptidelabs.nl\/?p=1054"},"modified":"2026-10-14T20:53:26","modified_gmt":"2026-10-14T18:53:26","slug":"hplc-chromatogram","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/dutchpeptidelabs.nl\/es\/blogs\/leren-over-peptiden\/hplc-chromatogram","title":{"rendered":"Cromatograma de HPLC: explicaci\u00f3n y ejemplos resueltos para estudiantes"},"content":{"rendered":"<\/p>\n<p>Un cromatograma de HPLC es una representaci\u00f3n gr\u00e1fica de la respuesta del detector (eje y, expresada en mAU en la detecci\u00f3n UV) frente al tiempo de eluci\u00f3n o de retenci\u00f3n (eje x, en minutos). De un solo cromatograma se obtienen directamente tres tipos de informaci\u00f3n: la identificaci\u00f3n de un analito a trav\u00e9s de su tiempo de retenci\u00f3n (tR), la cuantificaci\u00f3n a trav\u00e9s del \u00e1rea del pico en combinaci\u00f3n con una recta de calibrado, y una comprobaci\u00f3n del sistema a trav\u00e9s de par\u00e1metros como la resoluci\u00f3n (Rs), los platos te\u00f3ricos (N) y la estabilidad de la l\u00ednea base. Los sistemas de Waters, Thermo Fisher Scientific y Shimadzu generan todos el mismo tipo de gr\u00e1fico, pero el software de datos correspondiente (Empower, Chromeleon y LabSolutions) difiere en la forma de integrar y notificar los picos.<\/p>\n<p>Las tres cosas que se comprueban en el primer minuto:<\/p>\n<ul>\n<li>\n<strong>Estabilidad de la l\u00ednea base<\/strong>: una l\u00ednea base plana y con poco ruido es la condici\u00f3n previa para una integraci\u00f3n fiable.<\/li>\n<li>\n<strong>Tiempo de retenci\u00f3n frente a una referencia<\/strong>: compara el tR de cada pico con el de un patr\u00f3n de referencia en el mismo sistema.<\/li>\n<li>\n<strong>\u00c1rea del pico frente a altura del pico<\/strong>: utiliza siempre el \u00e1rea del pico para la cuantificaci\u00f3n, no la altura del pico.<\/li>\n<\/ul>\n<p><strong>Consejo pr\u00e1ctico:<\/strong> <em>Comprueba el \u00e1rea del pico antes que la altura del pico y verifica cada identificaci\u00f3n con un patr\u00f3n de referencia certificado. La altura del pico es m\u00e1s sensible a las variaciones de anchura del pico causadas por cambios en la columna o en el flujo; el \u00e1rea del pico se mantiene m\u00e1s estable.<\/em><\/p>\n<hr>\n<h2 id=\"inhoudsopgave\" tabindex=\"-1\">\u00cdndice<\/h2>\n<ul>\n<li><a href=\"#wat-toont-de-anatomie-van-een-hplc-chromatogram\">\u00bfQu\u00e9 muestra la anatom\u00eda de un cromatograma de HPLC?<\/a><\/li>\n<li><a href=\"#welke-formules-gebruik-je-voor-chromatografische-parameters\">\u00bfQu\u00e9 f\u00f3rmulas se utilizan para los par\u00e1metros cromatogr\u00e1ficos?<\/a><\/li>\n<li><a href=\"#hoe-ga-je-van-piekoppervlak-naar-concentratie\">\u00bfC\u00f3mo se pasa del \u00e1rea del pico a la concentraci\u00f3n?<\/a><\/li>\n<li><a href=\"#hoe-beinvloedt-de-detector-het-chromatogram\">\u00bfC\u00f3mo influye el detector en el cromatograma?<\/a><\/li>\n<li><a href=\"#isocratisch-of-gradient-wat-zie-je-in-het-chromatogram\">Isocr\u00e1tica o en gradiente: \u00bfqu\u00e9 se ve en el cromatograma?<\/a><\/li>\n<li><a href=\"#hoe-interpreteer-je-een-chromatogram-stap-voor-stap\">\u00bfC\u00f3mo se interpreta un cromatograma paso a paso?<\/a><\/li>\n<li><a href=\"#welke-problemen-zijn-zichtbaar-in-een-chromatogram-en-hoe-los-je-ze-op\">\u00bfQu\u00e9 problemas se ven en un cromatograma y c\u00f3mo se resuelven?<\/a><\/li>\n<li><a href=\"#twee-uitgewerkte-voorbeelden-met-volledige-berekeningen\">Dos ejemplos resueltos con c\u00e1lculos completos<\/a><\/li>\n<li><a href=\"#wat-zijn-de-kernverschillen-tussen-hplc-en-gc\">\u00bfCu\u00e1les son las diferencias fundamentales entre la HPLC y la GC?<\/a><\/li>\n<li><a href=\"#hoe-extraheer-je-retentietijden-en-piekoppervlakken-uit-een-chromatogram\">\u00bfC\u00f3mo se extraen los tiempos de retenci\u00f3n y las \u00e1reas de los picos de un cromatograma?<\/a><\/li>\n<li><a href=\"#stap-voor-stap-kwantificatie-met-een-kalibratiecurve\">Cuantificaci\u00f3n paso a paso con una curva de calibrado<\/a><\/li>\n<li><a href=\"#hoe-herken-en-onderscheid-je-overlappende-pieken\">\u00bfC\u00f3mo se reconocen y distinguen los picos solapados?<\/a><\/li>\n<li><a href=\"#belangrijkste-inzichten\">Conclusiones principales<\/a><\/li>\n<li><a href=\"#wat-studenten-en-junior-wetenschappers-vaak-onderschatten\">Lo que los estudiantes y los cient\u00edficos noveles suelen subestimar<\/a><\/li>\n<li><a href=\"#aanbevolen-bronnen-voor-verder-lezen\">Lecturas recomendadas<\/a><\/li>\n<\/ul>\n<h2 id=\"wat-toont-de-anatomie-van-een-hplc-chromatogram\" tabindex=\"-1\">\u00bfQu\u00e9 muestra la anatom\u00eda de un cromatograma de HPLC?<\/h2>\n<p>El eje x indica el tiempo de retenci\u00f3n en minutos, a veces expresado como volumen de eluci\u00f3n (mL). El eje y muestra la respuesta del detector: en la detecci\u00f3n UV, en miliunidades de absorbancia (mAU); en la espectrometr\u00eda de masas, como corriente i\u00f3nica; en la refractometr\u00eda, como unidades de \u00edndice de refracci\u00f3n. La respuesta del detector en mAU es la unidad m\u00e1s utilizada en los laboratorios de rutina.<\/p>\n<p>T\u00e9rminos fundamentales que reconocer\u00e1 en cualquier gr\u00e1fico:<\/p>\n<ul>\n<li>\n<strong>t0 \/ tM<\/strong>: tiempo muerto, el tiempo que necesita una sustancia no retenida para atravesar la columna.<\/li>\n<li>\n<strong>tR<\/strong>: tiempo de retenci\u00f3n, medido desde la inyecci\u00f3n hasta el m\u00e1ximo del pico.<\/li>\n<li>\n<strong>tR&#8217;<\/strong>: tiempo de retenci\u00f3n neto (o ajustado), calculado como tR \u2212 tM; representa la interacci\u00f3n real con la fase estacionaria.<\/li>\n<li>\n<strong>\u00c1rea del pico<\/strong>: la integral bajo la curva del pico; una medida directa de la cantidad de analito.<\/li>\n<li>\n<strong>Altura del pico<\/strong>: la respuesta m\u00e1xima del detector en un pico; \u00fatil para una comparaci\u00f3n r\u00e1pida, pero menos robusta para la cuantificaci\u00f3n.<\/li>\n<li>\n<strong>Factor de cola (Tf)<\/strong>: una medida de la forma del pico; lo ideal es Tf = 1,0 y lo aceptable, 0,8\u20131,5.<\/li>\n<\/ul>\n<p>La l\u00ednea base es la l\u00ednea que representa la respuesta del detector en ausencia de analitos. El ruido es la fluctuaci\u00f3n aleatoria en torno a esa l\u00ednea base. Una relaci\u00f3n se\u00f1al\/ruido (S\/N) de al menos 3 se considera el l\u00edmite de detecci\u00f3n (LOD); una S\/N de 10, el l\u00edmite de cuantificaci\u00f3n (LOQ). Una l\u00ednea base con deriva, visible como una l\u00ednea que sube o baja gradualmente, indica inestabilidad t\u00e9rmica del detector, un equilibrado insuficiente de la columna o una composici\u00f3n cambiante de la fase m\u00f3vil.<\/p>\n<p>Programas como Empower (Waters) o Chromeleon (Thermo Fisher Scientific) integran los picos autom\u00e1ticamente trazando una l\u00ednea base desde el inicio hasta el final de un pico y calculando el \u00e1rea comprendida entre ambos. La inspecci\u00f3n visual antes del informe final sigue siendo necesaria: la integraci\u00f3n autom\u00e1tica a veces no detecta una l\u00ednea base inclinada o integra picos solapados como uno solo.<\/p>\n<p><img decoding=\"async\" src=\"https:\/\/csuxjmfbwmkxiegfpljm.supabase.co\/storage\/v1\/object\/public\/blog-images\/organization-48623\/1785606957756_Hands-operating-HPLC-instrument-control-panel.jpeg\" alt=\"Unas manos manejando el panel de control de un equipo de HPLC.\"><\/p>\n<hr>\n<p><img decoding=\"async\" src=\"https:\/\/csuxjmfbwmkxiegfpljm.supabase.co\/storage\/v1\/object\/public\/blog-images\/organization-48623\/1785606967408_Vertical-infographic-of-HPLC-chromatogram-key-steps.jpeg\" alt=\"Infograf\u00eda vertical: los pasos principales de un cromatograma de HPLC expuestos con claridad\"><\/p>\n<h2 id=\"welke-formules-gebruik-je-voor-chromatografische-parameters\" tabindex=\"-1\">\u00bfQu\u00e9 f\u00f3rmulas se utilizan para los par\u00e1metros cromatogr\u00e1ficos?<\/h2>\n<p>Los cinco par\u00e1metros en los que se apoyan la interpretaci\u00f3n anal\u00edtica y la comprobaci\u00f3n del sistema, con sus f\u00f3rmulas:<\/p>\n<p><strong>Tiempo de retenci\u00f3n neto<\/strong><br \/>\ntR&#8217; = tR \u2212 tM<\/p>\n<p><img decoding=\"async\" src=\"https:\/\/csuxjmfbwmkxiegfpljm.supabase.co\/storage\/v1\/object\/public\/blog-images\/organization-48623\/1785606962205_Scientist-calculating-chromatographic-parameters-at-desk.jpeg\" alt=\"Un investigador en un escritorio, concentrado en el c\u00e1lculo de par\u00e1metros cromatogr\u00e1ficos.\"><\/p>\n<p><strong>Factor de capacidad (k)<\/strong><br \/>\nk = tR&#8217; \/ tM = (tR \u2212 tM) \/ tM<\/p>\n<p>En la pr\u00e1ctica es deseable un valor de k entre 1 y 10; fuera de este intervalo, la separaci\u00f3n es demasiado r\u00e1pida o demasiado lenta.<\/p>\n<p><strong>Selectividad (\u03b1)<\/strong><br \/>\n\u03b1 = k\u2082 \/ k\u2081 (donde k\u2082 &gt; k\u2081)<\/p>\n<p>\u03b1 &gt; 1 significa que dos sustancias pueden distinguirse; cuanto mayor es \u03b1, mejor es la selectividad.<\/p>\n<p><strong>Platos te\u00f3ricos (N)<\/strong><br \/>\nN = 16 \u00d7 (tR \/ w)\u00b2, donde w es la anchura del pico en la base<br \/>\no bien: N = 5,54 \u00d7 (tR \/ w\u2080.\u2085)\u00b2, donde w\u2080.\u2085 es la anchura a media altura<\/p>\n<p>Un N m\u00e1s alto indica un mejor rendimiento de la columna. Los valores t\u00edpicos para una columna C18 de 150 mm se sit\u00faan entre 5000 y 20 000 platos te\u00f3ricos.<\/p>\n<p><strong>Resoluci\u00f3n (Rs)<\/strong><br \/>\nRs = 2 \u00d7 (tR2 \u2212 tR1) \/ (w1 + w2)<\/p>\n<p>Rs \u2265 1,5 es el est\u00e1ndar para la separaci\u00f3n a l\u00ednea base en m\u00e9todos cuantitativos; Rs = 1,0 da aproximadamente un 4 % de solapamiento.<\/p>\n<p><strong>Factor de cola (Tf)<\/strong><br \/>\nTf = (b \/ a), donde a es la distancia desde el m\u00e1ximo del pico hasta el flanco anterior y b la distancia hasta el flanco posterior, medidas al 5 % de la altura del pico.<\/p>\n<h3 id=\"gewerkt-voorbeeld-n-en-rs-berekenen\" tabindex=\"-1\">Ejemplo resuelto: c\u00e1lculo de N y Rs<\/h3>\n<p>Supongamos dos picos contiguos con los siguientes valores:<\/p>\n<ul>\n<li>Pico 1: tR1 = 5,00 min, w1 = 0,40 min<\/li>\n<li>Pico 2: tR2 = 5,60 min, w2 = 0,44 min<\/li>\n<li>tM = 0,80 min<\/li>\n<\/ul>\n<p><strong>Paso 1 \u2014 N para el pico 1:<\/strong><br \/>\nN = 16 \u00d7 (5,00 \/ 0,40)\u00b2 = 16 \u00d7 156,25 = <strong>2500 platos te\u00f3ricos<\/strong><\/p>\n<p><strong>Paso 2 \u2014 Rs:<\/strong><br \/>\nRs = 2 \u00d7 (5,60 \u2212 5,00) \/ (0,40 + 0,44) = 2 \u00d7 0,60 \/ 0,84 = <strong>1,43<\/strong><\/p>\n<p>Rs = 1,43 queda justo por debajo del l\u00edmite ideal de 1,5. Para la cuantificaci\u00f3n es recomendable optimizar el m\u00e9todo: aumentar la longitud de la columna, reducir el flujo o ajustar la composici\u00f3n de la fase m\u00f3vil.<\/p>\n<hr>\n<h2 id=\"hoe-ga-je-van-piekoppervlak-naar-concentratie\" tabindex=\"-1\">\u00bfC\u00f3mo se pasa del \u00e1rea del pico a la concentraci\u00f3n?<\/h2>\n<p>El \u00e1rea del pico es una medida directa de la cantidad de analito que pasa por el detector. Una diferencia de un factor 10 en el \u00e1rea del pico corresponde a una diferencia de un factor 10 en la concentraci\u00f3n, siempre que la respuesta del detector sea lineal en el intervalo de trabajo. La altura del pico es m\u00e1s sensible a las variaciones de anchura del pico y, por tanto, menos adecuada para una cuantificaci\u00f3n exacta; es un error frecuente entre los estudiantes equiparar directamente un pico m\u00e1s alto con una concentraci\u00f3n m\u00e1s alta.<\/p>\n<h3 id=\"stap-1-correcte-integratie\" tabindex=\"-1\">Paso 1: integraci\u00f3n correcta<\/h3>\n<p>Fija manualmente los l\u00edmites de la l\u00ednea base si el software traza una l\u00ednea base desviada. Filtra el ruido con una constante de tiempo adecuada, pero evita un filtrado excesivo, que ensancha el pico de forma artificial.<\/p>\n<h3 id=\"stap-2-kalibratielijn-met-externe-standaarden\" tabindex=\"-1\">Paso 2: recta de calibrado con patrones externos<\/h3>\n<p>Prepara al menos cuatro soluciones patr\u00f3n de concentraci\u00f3n conocida. Mide el \u00e1rea del pico de cada patr\u00f3n en condiciones id\u00e9nticas.<\/p>\n<table>\n<thead>\n<tr>\n<th>Patr\u00f3n<\/th>\n<th>Concentraci\u00f3n (\u00b5g\/mL)<\/th>\n<th>\u00c1rea del pico (mAU\u00b7s)<\/th>\n<\/tr>\n<\/thead>\n<tbody>\n<tr>\n<td>S1<\/td>\n<td>\u2014<\/td>\n<td>2500<\/td>\n<\/tr>\n<tr>\n<td>S2<\/td>\n<td>1,0<\/td>\n<td>2490<\/td>\n<\/tr>\n<tr>\n<td>S3<\/td>\n<td>2,0<\/td>\n<td>4985<\/td>\n<\/tr>\n<tr>\n<td>S4<\/td>\n<td>5,00<\/td>\n<td>12 455<\/td>\n<\/tr>\n<\/tbody>\n<\/table>\n<h3 id=\"stap-3-lineaire-regressie-en-monsterberekening\" tabindex=\"-1\">Paso 3: regresi\u00f3n lineal y c\u00e1lculo de la muestra<\/h3>\n<p>Realiza una regresi\u00f3n lineal: \u00c1rea = a \u00d7 Concentraci\u00f3n + b. Con los datos anteriores se obtiene aproximadamente:<\/p>\n<p>a \u2248 2490 mAU\u00b7s por \u00b5g\/mL, b \u2248 5 mAU\u00b7s (una ordenada en el origen pr\u00e1cticamente nula, lo que confirma una buena linealidad).<\/p>\n<p>Una muestra con un \u00e1rea de pico medida de 6200 mAU\u00b7s da:<\/p>\n<p>Concentraci\u00f3n = (6200 \u2212 5) \/ 2490 \u2248 <strong>2,49 \u00b5g\/mL<\/strong><\/p>\n<p>El LOD y el LOQ se determinan conceptualmente a trav\u00e9s de la relaci\u00f3n se\u00f1al\/ruido: LOD con S\/N = 3, LOQ con S\/N = 10. Para la validaci\u00f3n de m\u00e9todos cuantitativos, la gu\u00eda ICH Q2(R1) remite a criterios adicionales de linealidad, exactitud y precisi\u00f3n.<\/p>\n<p><strong>Advertencia<\/strong>: la respuesta del detector var\u00eda seg\u00fan el analito. Un detector UV a 254 nm no responde a sustancias sin una estructura arom\u00e1tica o conjugada. Utiliza siempre un patr\u00f3n de referencia de la sustancia que se cuantifica, o un patr\u00f3n interno de estructura comparable, para determinar correctamente los factores de respuesta.<\/p>\n<hr>\n<h2 id=\"hoe-beinvloedt-de-detector-het-chromatogram\" tabindex=\"-1\">\u00bfC\u00f3mo influye el detector en el cromatograma?<\/h2>\n<p>La elecci\u00f3n del detector determina qu\u00e9 analitos son visibles, qu\u00e9 sensibilidad tiene la medici\u00f3n y c\u00f3mo se interpreta el eje y.<\/p>\n<ul>\n<li>\n<strong>Detector UV\/Vis<\/strong>: mide la absorci\u00f3n a una longitud de onda fija; expresa los resultados en mAU. Adecuado para compuestos arom\u00e1ticos, p\u00e9ptidos (214 nm para la banda del enlace pept\u00eddico) y la mayor\u00eda de las sustancias farmac\u00e9uticas. Sencillo y robusto.<\/li>\n<li>\n<strong>PDA (detector de matriz de fotodiodos)<\/strong>: registra un espectro UV completo en cada punto temporal. \u00datil para la identificaci\u00f3n espectral y la comprobaci\u00f3n de la pureza del pico: un pico con un espectro incoherente a lo largo de su forma indica coeluci\u00f3n.<\/li>\n<li>\n<strong>MS (espectr\u00f3metro de masas, LC-MS)<\/strong>: proporciona informaci\u00f3n de masa para cada pico, lo que permite la confirmaci\u00f3n estructural. Imprescindible para el an\u00e1lisis de trazas y de compuestos desconocidos. Los m\u00e9todos de ionizaci\u00f3n como la ESI (ionizaci\u00f3n por electrospray) o la APCI determinan qu\u00e9 compuestos se ionizan.<\/li>\n<li>\n<strong>RI (detector de \u00edndice de refracci\u00f3n)<\/strong>: mide el cambio del \u00edndice de refracci\u00f3n; adecuado para analitos que no absorben, como az\u00facares, pol\u00edmeros y l\u00edpidos. Sensible a las fluctuaciones de temperatura y no utilizable con eluci\u00f3n en gradiente.<\/li>\n<\/ul>\n<p>Consejos pr\u00e1cticos para cada detector:<\/p>\n<ul>\n<li>Con UV\/Vis, elige la longitud de onda del m\u00e1ximo de absorci\u00f3n del analito para obtener la m\u00e1xima sensibilidad; 220 nm ofrece una cobertura amplia, pero un ruido de fondo mayor.<\/li>\n<li>Estabiliza el detector de RI durante al menos 30\u201360 minutos antes de utilizarlo; incluso peque\u00f1as variaciones de temperatura provocan deriva de la l\u00ednea base.<\/li>\n<li>Con LC-MS, comprueba los ajustes de ionizaci\u00f3n (voltaje del capilar, temperatura) para cada clase de analito; un ajuste incorrecto suprime la se\u00f1al por completo.<\/li>\n<\/ul>\n<p><strong>Consejo pr\u00e1ctico:<\/strong> <em>Al cuantificar, comprueba siempre que la respuesta del detector es lineal en el intervalo de concentraciones de inter\u00e9s. Un valor de R\u00b2 de la recta de calibrado inferior a 0,995 indica que se ha superado el intervalo lineal o que la medici\u00f3n est\u00e1 sufriendo interferencias.<\/em><\/p>\n<hr>\n<h2 id=\"isocratisch-of-gradient-wat-zie-je-in-het-chromatogram\" tabindex=\"-1\">Isocr\u00e1tica o en gradiente: \u00bfqu\u00e9 se ve en el cromatograma?<\/h2>\n<p>En la <strong>eluci\u00f3n isocr\u00e1tica<\/strong>, la composici\u00f3n de la fase m\u00f3vil se mantiene constante durante todo el an\u00e1lisis. Los tiempos de retenci\u00f3n son reproducibles y el m\u00e9todo es f\u00e1cil de validar. Los picos de los componentes que eluyen pronto son estrechos y n\u00edtidos; los componentes que eluyen m\u00e1s tarde se ensanchan por difusi\u00f3n longitudinal.<\/p>\n<p>En la <strong>eluci\u00f3n en gradiente<\/strong>, la proporci\u00f3n de los componentes de la fase m\u00f3vil (agua\/acetonitrilo, por ejemplo) cambia gradualmente durante el an\u00e1lisis. Los picos que eluyen m\u00e1s tarde se comprimen: eluyen de forma m\u00e1s n\u00edtida que en condiciones isocr\u00e1ticas, lo que aumenta la sensibilidad. La eluci\u00f3n en gradiente es imprescindible para muestras con componentes de un amplio intervalo de polaridad, como extractos biol\u00f3gicos o mezclas de p\u00e9ptidos.<\/p>\n<p>Diferencias visibles en el cromatograma:<\/p>\n<ul>\n<li>\n<strong>Isocr\u00e1tica<\/strong>: estabilidad uniforme de la l\u00ednea base, anchura de pico creciente a tiempos de retenci\u00f3n m\u00e1s largos, absorci\u00f3n de fondo estable.<\/li>\n<li>\n<strong>Gradiente<\/strong>: una l\u00ednea base ascendente o descendente por la absorci\u00f3n UV cambiante de la fase m\u00f3vil (absorci\u00f3n del disolvente), picos comprimidos para los componentes que eluyen tarde y una fase de reequilibrado al final del an\u00e1lisis.<\/li>\n<\/ul>\n<p>Elige la eluci\u00f3n isocr\u00e1tica para muestras sencillas con componentes de polaridad comparable y cuando la validaci\u00f3n del m\u00e9todo exija sencillez. Elige el gradiente cuando los tiempos de retenci\u00f3n de los componentes est\u00e9n demasiado separados para una \u00fanica condici\u00f3n isocr\u00e1tica, o cuando los picos tard\u00edos sean demasiado anchos para una integraci\u00f3n fiable.<\/p>\n<hr>\n<h2 id=\"hoe-interpreteer-je-een-chromatogram-stap-voor-stap\" tabindex=\"-1\">\u00bfC\u00f3mo se interpreta un cromatograma paso a paso?<\/h2>\n<p>Un enfoque estructurado evita que los errores en los datos se descubran tarde. La siguiente lista de comprobaci\u00f3n sirve como protocolo m\u00ednimo para cada an\u00e1lisis.<\/p>\n<ol>\n<li>\n<strong>Comprueba la l\u00ednea base y el ruido<\/strong>: \u00bfes la l\u00ednea base plana y estable antes del primer pico? Un ruido superior a 0,5 mAU en la detecci\u00f3n UV requiere investigaci\u00f3n (desgasificaci\u00f3n, sustituci\u00f3n de filtros).<\/li>\n<li>\n<strong>Compara los tiempos de retenci\u00f3n con el patr\u00f3n de referencia<\/strong>: el tR de cada analito no debe desviarse m\u00e1s de \u00b10,1 min del de la referencia en el mismo sistema y en las mismas condiciones.<\/li>\n<li>\n<strong>Eval\u00faa la forma del pico<\/strong>: factor de cola entre 0,8 y 1,5; un Tf &gt; 2,0 indica degradaci\u00f3n de la columna o una fuerte adsorci\u00f3n a centros activos.<\/li>\n<li>\n<strong>Comprueba los ajustes de integraci\u00f3n<\/strong>: \u00bfest\u00e1n bien situados los l\u00edmites de la l\u00ednea base? \u00bfSe separan correctamente los picos solapados o se integran como uno solo?<\/li>\n<li>\n<strong>Calcula la Rs de los pares cr\u00edticos<\/strong>: Rs \u2265 1,5 para m\u00e9todos cuantitativos; Rs &lt; 1,0 exige ajustar el m\u00e9todo.<\/li>\n<li>\n<strong>Comprueba el patr\u00f3n interno o la recuperaci\u00f3n<\/strong>: la relaci\u00f3n de \u00e1reas del pico del patr\u00f3n interno no debe desviarse m\u00e1s de \u00b12 % entre inyecciones.<\/li>\n<\/ol>\n<h3 id=\"systeem-suitability-acceptatiecriteria\" tabindex=\"-1\">Criterios de aceptaci\u00f3n de la idoneidad del sistema<\/h3>\n<table>\n<thead>\n<tr>\n<th>Par\u00e1metro<\/th>\n<th>L\u00edmite de aceptaci\u00f3n t\u00edpico<\/th>\n<\/tr>\n<\/thead>\n<tbody>\n<tr>\n<td>Platos te\u00f3ricos (N)<\/td>\n<td>\u2265 2000 (espec\u00edfico del m\u00e9todo)<\/td>\n<\/tr>\n<tr>\n<td>Resoluci\u00f3n (Rs)<\/td>\n<td>\u2265 1,5 para pares cr\u00edticos<\/td>\n<\/tr>\n<tr>\n<td>Factor de cola (Tf)<\/td>\n<td>0,8\u20131,5<\/td>\n<\/tr>\n<tr>\n<td>RSD del \u00e1rea del pico (n=6)<\/td>\n<td>\u2264 1,0 % para m\u00e9todos cuantitativos<\/td>\n<\/tr>\n<tr>\n<td>RSD del tiempo de retenci\u00f3n (n=6)<\/td>\n<td>\u2264 0,5 %<\/td>\n<\/tr>\n<\/tbody>\n<\/table>\n<p>Si uno o varios par\u00e1metros quedan fuera de los l\u00edmites de aceptaci\u00f3n, no repitas el an\u00e1lisis sin identificar antes la causa. Un an\u00e1lisis repetido con el mismo fallo del sistema no proporciona datos utilizables.<\/p>\n<hr>\n<h2 id=\"welke-problemen-zijn-zichtbaar-in-een-chromatogram-en-hoe-los-je-ze-op\" tabindex=\"-1\">\u00bfQu\u00e9 problemas se ven en un cromatograma y c\u00f3mo se resuelven?<\/h2>\n<p>Los artefactos de un cromatograma son se\u00f1ales diagn\u00f3sticas, no una casualidad. Cada patr\u00f3n apunta a una causa concreta.<\/p>\n<ul>\n<li>\n<strong>Deriva de la l\u00ednea base<\/strong>: las causas son un equilibrado insuficiente de la columna, fluctuaciones de temperatura o una composici\u00f3n cambiante de la fase m\u00f3vil. Soluci\u00f3n: equilibra la columna con al menos 10 vol\u00famenes de columna, comprueba la temperatura del horno de columna y utiliza fase m\u00f3vil reci\u00e9n preparada.<\/li>\n<li>\n<strong>Ruido elevado<\/strong>: burbujas de aire en el detector o en la fase m\u00f3vil, una celda de flujo contaminada o una l\u00e1mpara defectuosa. Desgasifica la fase m\u00f3vil con helio o al vac\u00edo, limpia la celda de flujo y sustituye la l\u00e1mpara de deuterio en los detectores UV.<\/li>\n<li>\n<strong>Picos fantasma<\/strong>: picos sin un analito correspondiente, causados por impurezas en la fase m\u00f3vil, arrastre (carry-over) de una inyecci\u00f3n anterior o contaminaci\u00f3n en el sistema de inyecci\u00f3n. Lava el sistema con un disolvente fuerte y comprueba el procedimiento de lavado de la aguja.<\/li>\n<li>\n<strong>Coeluci\u00f3n<\/strong>: dos analitos eluyen como un \u00fanico pico ancho o asim\u00e9trico. Aumenta la Rs alargando la columna, ajustando el gradiente o eligiendo otra fase estacionaria. La detecci\u00f3n PDA ayuda a detectar la coeluci\u00f3n a trav\u00e9s de la incoherencia espectral a lo largo de la forma del pico.<\/li>\n<li>\n<strong>Picos desdoblados<\/strong>: un pico con dos m\u00e1ximos, causado por un hueco en la columna, una mala disoluci\u00f3n de la muestra o un disolvente de la muestra demasiado fuerte. Comprueba la cabeza de la columna, disuelve la muestra en la fase m\u00f3vil y reduce el volumen de inyecci\u00f3n.<\/li>\n<li>\n<strong>Picos anchos<\/strong>: un caudal demasiado alto, un volumen de inyecci\u00f3n demasiado grande o degradaci\u00f3n de la columna. Reduce el caudal, disminuye el volumen de inyecci\u00f3n o sustituye la columna.<\/li>\n<\/ul>\n<p><strong>Consejo pr\u00e1ctico:<\/strong> <em>Documenta sistem\u00e1ticamente cada cambio: fecha, lote de fase m\u00f3vil, identificaci\u00f3n de la columna y n\u00famero de inyecciones realizadas en ella. Los artefactos recurrentes casi siempre pueden atribuirse a un lote concreto o a una columna que ha llegado al final de su vida \u00fatil.<\/em><\/p>\n<hr>\n<h2 id=\"twee-uitgewerkte-voorbeelden-met-volledige-berekeningen\" tabindex=\"-1\">Dos ejemplos resueltos con c\u00e1lculos completos<\/h2>\n<h3 id=\"voorbeeld-a-identificatie-via-retentietijd\" tabindex=\"-1\">Ejemplo A: identificaci\u00f3n a trav\u00e9s del tiempo de retenci\u00f3n<\/h3>\n<p>Valores dados para un an\u00e1lisis de p\u00e9ptidos:<\/p>\n<ul>\n<li>tM = 0,80 min (medido con un marcador no retenido, por ejemplo uracilo)<\/li>\n<li>tR del patr\u00f3n de referencia (<a href=\"https:\/\/dutchpeptidelabs.nl\/products\/ghk-cu\" target=\"_blank\" rel=\"noopener\">GHK-Cu<\/a>, por ejemplo): 6,40 min<\/li>\n<li>tR de la muestra: 6,38 min<\/li>\n<\/ul>\n<p>C\u00e1lculo del tiempo de retenci\u00f3n neto:<br \/>\ntR&#8217; (referencia) = 6,40 \u2212 0,80 = <strong>5,60 min<\/strong><br \/>\ntR&#8217; (muestra) = 6,38 \u2212 0,80 = <strong>5,58 min<\/strong><\/p>\n<p>La diferencia de 0,02 min (1,2 segundos) est\u00e1 dentro del l\u00edmite de aceptaci\u00f3n de \u00b10,1 min. El pico de la muestra se identifica provisionalmente como la sustancia objetivo. La confirmaci\u00f3n definitiva requiere un segundo m\u00e9todo ortogonal o una confirmaci\u00f3n por MS.<\/p>\n<h3 id=\"voorbeeld-b-kwantificatie-via-externe-standaard\" tabindex=\"-1\">Ejemplo B: cuantificaci\u00f3n mediante un patr\u00f3n externo<\/h3>\n<p>Utiliza los datos de calibrado de la secci\u00f3n 4 (a = 2490 mAU\u00b7s por \u00b5g\/mL, b = 5 mAU\u00b7s).<\/p>\n<table>\n<thead>\n<tr>\n<th>Patr\u00f3n<\/th>\n<th>Concentraci\u00f3n (\u00b5g\/mL)<\/th>\n<th>\u00c1rea medida (mAU\u00b7s)<\/th>\n<th>\u00c1rea calculada (mAU\u00b7s)<\/th>\n<\/tr>\n<\/thead>\n<tbody>\n<tr>\n<td>S1<\/td>\n<td>\u2014<\/td>\n<td>2500<\/td>\n<td>2500<\/td>\n<\/tr>\n<tr>\n<td>S2<\/td>\n<td>1,0<\/td>\n<td>2490<\/td>\n<td>2490<\/td>\n<\/tr>\n<tr>\n<td>S3<\/td>\n<td>2,0<\/td>\n<td>4985<\/td>\n<td>4985<\/td>\n<\/tr>\n<tr>\n<td>S4<\/td>\n<td>5,00<\/td>\n<td>12 455<\/td>\n<td>12 455<\/td>\n<\/tr>\n<tr>\n<td>Muestra<\/td>\n<td>desconocida<\/td>\n<td>6200<\/td>\n<td>\u2014<\/td>\n<\/tr>\n<\/tbody>\n<\/table>\n<p>Concentraci\u00f3n de la muestra = (6200 \u2212 5) \/ 2490 = <strong>2,49 \u00b5g\/mL<\/strong><\/p>\n<p>La linealidad (R\u00b2 \u2248 0,9999) confirma que el m\u00e9todo es adecuado para la cuantificaci\u00f3n en este intervalo. Conserva con cada informe los ajustes de integraci\u00f3n, la identificaci\u00f3n de la columna y los n\u00fameros de lote de los patrones: la reproducibilidad solo puede demostrarse si las condiciones est\u00e1n completamente documentadas.<\/p>\n<p><strong>Consejo pr\u00e1ctico:<\/strong> <em>Guarda los ajustes de integraci\u00f3n como archivo de m\u00e9todo en el software de datos (Empower, Chromeleon o LabSolutions). Los ajustes manuales en cada an\u00e1lisis son una fuente de variabilidad y hacen que la comparaci\u00f3n entre an\u00e1lisis sea poco fiable.<\/em><\/p>\n<hr>\n<h2 id=\"wat-zijn-de-kernverschillen-tussen-hplc-en-gc\" tabindex=\"-1\">\u00bfCu\u00e1les son las diferencias fundamentales entre la HPLC y la GC?<\/h2>\n<p>Ambas t\u00e9cnicas producen un cromatograma con el tiempo de retenci\u00f3n en el eje x y la respuesta del detector en el eje y, pero sus campos de aplicaci\u00f3n y sus requisitos difieren de forma sustancial.<\/p>\n<table>\n<thead>\n<tr>\n<th>Caracter\u00edstica<\/th>\n<th>HPLC<\/th>\n<th>GC<\/th>\n<\/tr>\n<\/thead>\n<tbody>\n<tr>\n<td>Estado f\u00edsico de la muestra<\/td>\n<td>L\u00edquida o disuelta en un disolvente<\/td>\n<td>Vol\u00e1til o vaporizable<\/td>\n<\/tr>\n<tr>\n<td>Estabilidad t\u00e9rmica necesaria<\/td>\n<td>No<\/td>\n<td>S\u00ed (intervalo de temperatura espec\u00edfico del m\u00e9todo)<\/td>\n<\/tr>\n<tr>\n<td>Detectores t\u00edpicos<\/td>\n<td>UV\/Vis, PDA, MS, RI<\/td>\n<td>FID, TCD, MS, ECD<\/td>\n<\/tr>\n<tr>\n<td>Analitos adecuados<\/td>\n<td>Mol\u00e9culas polares, i\u00f3nicas o grandes (p\u00e9ptidos, prote\u00ednas, az\u00facares)<\/td>\n<td>Mol\u00e9culas peque\u00f1as, vol\u00e1tiles y t\u00e9rmicamente estables<\/td>\n<\/tr>\n<tr>\n<td>Fase m\u00f3vil<\/td>\n<td>Disolvente l\u00edquido (agua\/acetonitrilo, agua\/metanol)<\/td>\n<td>Gas portador inerte (helio, nitr\u00f3geno)<\/td>\n<\/tr>\n<\/tbody>\n<\/table>\n<p>Una regla pr\u00e1ctica: elige la HPLC para compuestos no vol\u00e1tiles, termol\u00e1biles o polares, como p\u00e9ptidos, amino\u00e1cidos y principios activos farmac\u00e9uticos. La GC es el m\u00e9todo preferido para compuestos org\u00e1nicos vol\u00e1tiles, disolventes residuales y gases.<\/p>\n<hr>\n<h2 id=\"hoe-extraheer-je-retentietijden-en-piekoppervlakken-uit-een-chromatogram\" tabindex=\"-1\">\u00bfC\u00f3mo se extraen los tiempos de retenci\u00f3n y las \u00e1reas de los picos de un cromatograma?<\/h2>\n<p>Extraer datos cuantitativos de un cromatograma es una habilidad que exige precisi\u00f3n, no solo conocer el software.<\/p>\n<p><strong>Determinaci\u00f3n del tiempo de retenci\u00f3n<\/strong>: ampl\u00eda el m\u00e1ximo del pico en el software de datos. Lee el valor de tR en el m\u00e1ximo exacto, no en el flanco. En los picos asim\u00e9tricos, el m\u00e1ximo puede desplazarse visualmente; utiliza el valor que calcula el software a partir de la segunda derivada.<\/p>\n<p><strong>Extracci\u00f3n del \u00e1rea del pico<\/strong>: comprueba primero los l\u00edmites de la l\u00ednea base que ha fijado el software. Una l\u00ednea base que empieza demasiado pronto o demasiado tarde da lugar a una sobreestimaci\u00f3n o subestimaci\u00f3n del \u00e1rea. En los picos solapados, elige una separaci\u00f3n perpendicular (una l\u00ednea vertical en el valle) o un m\u00e9todo tangencial, seg\u00fan el grado de solapamiento y las especificaciones del m\u00e9todo.<\/p>\n<p>Pasos pr\u00e1cticos en el software de datos:<\/p>\n<ul>\n<li>Abre el cromatograma en modo de integraci\u00f3n (por ejemplo, \u00abIntegration Events\u00bb en Empower o \u00abPeak Integration\u00bb en LabSolutions de Shimadzu).<\/li>\n<li>Ajusta la anchura m\u00ednima de pico y el umbral para suprimir el ruido sin perder picos reales.<\/li>\n<li>Exporta la tabla de integraci\u00f3n con tR, \u00e1rea del pico, altura del pico y factor de cola a una hoja de c\u00e1lculo para seguir calculando.<\/li>\n<li>Compara los valores de tR extra\u00eddos con el patr\u00f3n de referencia en el mismo sistema; una desviaci\u00f3n superior a \u00b10,1 min requiere verificaci\u00f3n.<\/li>\n<\/ul>\n<hr>\n<h2 id=\"stap-voor-stap-kwantificatie-met-een-kalibratiecurve\" tabindex=\"-1\">Cuantificaci\u00f3n paso a paso con una curva de calibrado<\/h2>\n<p>Un procedimiento completo de cuantificaci\u00f3n consta de cinco pasos que se realizan en un orden fijo.<\/p>\n<p><strong>Paso 1 \u2014 Preparar las soluciones patr\u00f3n<\/strong>: prepara al menos cuatro niveles de concentraci\u00f3n que abarquen el intervalo de concentraciones esperado de la muestra. Utiliza patrones de referencia certificados de pureza conocida; en el caso de los p\u00e9ptidos, son necesarios los CoA espec\u00edficos del lote facilitados por el proveedor.<\/p>\n<p><strong>Paso 2 \u2014 Medir los patrones<\/strong>: inyecta cada patr\u00f3n al menos dos veces en condiciones id\u00e9nticas (columna, fase m\u00f3vil, flujo, temperatura, volumen de inyecci\u00f3n). Calcula el \u00e1rea media del pico para cada nivel de concentraci\u00f3n.<\/p>\n<p><strong>Paso 3 \u2014 Construir la recta de calibrado<\/strong>: representa la concentraci\u00f3n (x) frente al \u00e1rea media del pico (y). Realiza una regresi\u00f3n lineal. Acepta la recta solo si R\u00b2 \u2265 0,999 para m\u00e9todos farmac\u00e9uticos cuantitativos, o R\u00b2 \u2265 0,995 como m\u00ednimo conforme a los principios de la ICH Q2(R1).<\/p>\n<p><strong>Paso 4 \u2014 Medir la muestra<\/strong>: inyecta la muestra exactamente en las mismas condiciones que los patrones. Lee el \u00e1rea del pico.<\/p>\n<p><strong>Paso 5 \u2014 Calcular la concentraci\u00f3n<\/strong>: utiliza la ecuaci\u00f3n de regresi\u00f3n:<\/p>\n<p>Concentraci\u00f3n (\u00b5g\/mL) = (\u00c1rea medida \u2212 b) \/ a<\/p>\n<p>donde a es la pendiente y b la ordenada en el origen de la recta de calibrado.<\/p>\n<p>Comprueba que la concentraci\u00f3n calculada est\u00e1 dentro del intervalo calibrado. Si el valor queda fuera del intervalo, diluye la muestra y repite la medici\u00f3n.<\/p>\n<hr>\n<h2 id=\"hoe-herken-en-onderscheid-je-overlappende-pieken\" tabindex=\"-1\">\u00bfC\u00f3mo se reconocen y distinguen los picos solapados?<\/h2>\n<p>Los picos solapados son uno de los retos m\u00e1s frecuentes en el an\u00e1lisis por HPLC. Se reconocen por un pico ancho y asim\u00e9trico con un hombro o un valle entre dos m\u00e1ximos, o por un pico cuyo espectro (con detecci\u00f3n PDA) es incoherente a lo largo de la forma del pico.<\/p>\n<p><strong>M\u00e9todos para distinguir picos solapados<\/strong>:<\/p>\n<p><strong>Mejorar la separaci\u00f3n cromatogr\u00e1fica<\/strong>: aumenta la Rs alargando la columna, reduciendo el tama\u00f1o de part\u00edcula de la fase estacionaria (por ejemplo, de 5 \u00b5m a part\u00edculas sub-2 \u00b5m de 1,8 \u00b5m para UHPLC), optimizando el gradiente o eligiendo otra fase estacionaria (por ejemplo, de C18 a C8 o fenilo).<\/p>\n<p><strong>Deconvoluci\u00f3n mediante el software de datos<\/strong>: los m\u00e9todos de integraci\u00f3n avanzados, como el ajuste EMG (Exponentially Modified Gaussian, gaussiana modificada exponencialmente), modelizan matem\u00e1ticamente la forma del pico y separan las contribuciones solapadas. Programas como Chromeleon (Thermo Fisher Scientific) y Empower (Waters) ofrecen opciones de deconvoluci\u00f3n. El m\u00e9todo funciona mejor cuando los picos est\u00e1n parcialmente separados (Rs entre 0,5 y 1,0) y se conocen las formas de los picos.<\/p>\n<p><strong>Deconvoluci\u00f3n espectral con PDA<\/strong>: cuando dos sustancias solapadas tienen espectros UV distintos, la detecci\u00f3n PDA puede separar las contribuciones por longitud de onda. No es una separaci\u00f3n cromatogr\u00e1fica completa, pero s\u00ed aporta informaci\u00f3n cuantitativa por componente.<\/p>\n<p><strong>A\u00f1adir un patr\u00f3n interno<\/strong>: un patr\u00f3n interno con un tiempo de retenci\u00f3n conocido pr\u00f3ximo a los picos solapados ayuda a calibrar el l\u00edmite de integraci\u00f3n y a corregir errores sistem\u00e1ticos.<\/p>\n<p>Con un solapamiento importante (Rs &lt; 0,5), la optimizaci\u00f3n del m\u00e9todo cromatogr\u00e1fico es la \u00fanica soluci\u00f3n fiable. La deconvoluci\u00f3n introduce una incertidumbre dependiente del modelo que limita la exactitud de la cuantificaci\u00f3n.<\/p>\n<hr>\n<h2 id=\"belangrijkste-inzichten\" tabindex=\"-1\">Conclusiones principales<\/h2>\n<p>Un cromatograma de HPLC proporciona identificaci\u00f3n, cuantificaci\u00f3n y una comprobaci\u00f3n del sistema en una sola medici\u00f3n, siempre que la l\u00ednea base sea estable, la integraci\u00f3n est\u00e9 bien configurada y los tiempos de retenci\u00f3n se comparen con patrones de referencia certificados.<\/p>\n<table>\n<thead>\n<tr>\n<th>Aspecto<\/th>\n<th>Detalles<\/th>\n<\/tr>\n<\/thead>\n<tbody>\n<tr>\n<td>Identificaci\u00f3n a trav\u00e9s del tiempo de retenci\u00f3n<\/td>\n<td>Compara siempre el tR de la muestra con un patr\u00f3n de referencia en el mismo sistema; una desviaci\u00f3n \u2264 0,1 min es aceptable.<\/td>\n<\/tr>\n<tr>\n<td>Cuantificaci\u00f3n a trav\u00e9s del \u00e1rea del pico<\/td>\n<td>Utiliza el \u00e1rea del pico, no la altura del pico, y construye una recta de calibrado con al menos cuatro patrones (R\u00b2 \u2265 0,999).<\/td>\n<\/tr>\n<tr>\n<td>Comprobar la idoneidad del sistema<\/td>\n<td>Comprueba N, Rs (\u2265 1,5), el factor de cola (0,8\u20131,5) y la RSD del \u00e1rea del pico (\u2264 1,0 %) antes de elaborar el informe.<\/td>\n<\/tr>\n<tr>\n<td>Conservar la documentaci\u00f3n<\/td>\n<td>Guarda los ajustes de integraci\u00f3n, la identificaci\u00f3n de la columna, los n\u00fameros de lote y los CoA de cada an\u00e1lisis para garantizar la reproducibilidad y facilitar la resoluci\u00f3n de problemas.<\/td>\n<\/tr>\n<tr>\n<td>Abordar los picos solapados<\/td>\n<td>Mejora la Rs por v\u00eda cromatogr\u00e1fica o aplica la deconvoluci\u00f3n EMG; con Rs &lt; 0,5, es necesario optimizar el m\u00e9todo.<\/td>\n<\/tr>\n<\/tbody>\n<\/table>\n<hr>\n<h2 id=\"wat-studenten-en-junior-wetenschappers-vaak-onderschatten\" tabindex=\"-1\">Lo que los estudiantes y los cient\u00edficos noveles suelen subestimar<\/h2>\n<p>La parte t\u00e9cnica de la interpretaci\u00f3n de la HPLC puede aprenderse en libros de texto y tutoriales. Lo que recibe menos atenci\u00f3n es la disciplina de la documentaci\u00f3n y el valor de variar deliberadamente un solo par\u00e1metro cada vez.<\/p>\n<p>Un error frecuente: repetir un an\u00e1lisis sin entender la causa de una desviaci\u00f3n. Si el factor de cola es de repente 2,3 cuando ayer era 1,1, no tiene sentido repetir hasta haber establecido la causa. Una documentaci\u00f3n sistem\u00e1tica, que incluya la antig\u00fcedad de la columna, el lote de fase m\u00f3vil y el historial de inyecciones, hace posible este tipo de diagn\u00f3stico.<\/p>\n<p>Como material de aprendizaje se recomiendan las gu\u00edas b\u00e1sicas de HPLC de Waters y los tutoriales de Thermo Fisher Scientific, ambos de libre acceso y con cromatogramas de ejemplo resueltos. Shimadzu ofrece explicaciones pr\u00e1cticas de los ajustes de integraci\u00f3n en la documentaci\u00f3n de LabSolutions. Para los conceptos de validaci\u00f3n (LOD, LOQ, linealidad, precisi\u00f3n), la ICH Q2(R1) es la referencia principal.<\/p>\n<p>Practica con herramientas de integraci\u00f3n digital integrando varias veces el mismo conjunto de datos con distintos ajustes y comparando los resultados. Compara tus propios an\u00e1lisis con cromatogramas de referencia publicados de los mismos compuestos. Lleva un cuaderno de laboratorio en el que registres no solo los resultados, sino tambi\u00e9n las decisiones: \u00bfpor qu\u00e9 se traz\u00f3 aqu\u00ed la l\u00ednea base?, \u00bfpor qu\u00e9 se integr\u00f3 este pico como un solo componente?<\/p>\n<p><strong>Consejo pr\u00e1ctico:<\/strong> <em>Al optimizar un m\u00e9todo, cambia siempre un solo par\u00e1metro cada vez. Dos cambios simult\u00e1neos hacen imposible distinguir la causa del efecto.<\/em><\/p>\n<hr>\n<h2 id=\"aanbevolen-bronnen-voor-verder-lezen\" tabindex=\"-1\">Lecturas recomendadas<\/h2>\n<ul>\n<li>\n<strong><a href=\"https:\/\/www.waters.com\/nextgen\/us\/en\/education\/primers\/beginner-s-guide-to-liquid-chromatography\/identifying-and-quantitating-compounds.html\" rel=\"nofollow noopener noreferrer\" target=\"_blank\">Gu\u00eda b\u00e1sica de HPLC de Waters<\/a><\/strong>: explicaci\u00f3n pr\u00e1ctica de la identificaci\u00f3n y la cuantificaci\u00f3n, con ejemplos resueltos de c\u00e1lculos de \u00e1reas de pico y de calibrado; accesible para estudiantes y laboratorios de rutina.<\/li>\n<li>\n<strong>Tutoriales de Chromeleon de Thermo Fisher Scientific<\/strong>: explicaci\u00f3n paso a paso de los ajustes de integraci\u00f3n, la idoneidad del sistema y los sistemas de datos; disponibles en el sitio web de Thermo Fisher Scientific.<\/li>\n<li>\n<strong>Documentaci\u00f3n de LabSolutions de Shimadzu<\/strong>: manuales pr\u00e1cticos sobre ajustes de integraci\u00f3n e interpretaci\u00f3n de cromatogramas; relevantes para los usuarios de sistemas Shimadzu.<\/li>\n<li>\n<strong><a href=\"https:\/\/nl.wikipedia.org\/wiki\/Retentietijd_(chromatografie)\" rel=\"nofollow noopener noreferrer\" target=\"_blank\">Tiempo de retenci\u00f3n (cromatograf\u00eda) \u2014 Wikipedia<\/a><\/strong>: una definici\u00f3n concisa en neerland\u00e9s de tR, tM y tR&#8217; con f\u00f3rmulas; \u00fatil como referencia r\u00e1pida.<\/li>\n<li>\n<strong>ICH Q2(R1) \u2014 Validation of Analytical Procedures<\/strong>: la principal directriz internacional para la validaci\u00f3n de m\u00e9todos cuantitativos, con criterios de linealidad, LOD, LOQ, exactitud y precisi\u00f3n. Disponible en el sitio web de la ICH (ich.org).<\/li>\n<li>\n<strong>UHPLCs \u2014 How to read HPLC data<\/strong>: una explicaci\u00f3n pr\u00e1ctica en neerland\u00e9s sobre la interpretaci\u00f3n de cromatogramas, la inspecci\u00f3n de la l\u00ednea base y la integraci\u00f3n.<\/li>\n<\/ul>\n<p>Dutchpeptidelabs facilita con cada producto un CoA espec\u00edfico del lote, basado en an\u00e1lisis de HPLC independientes. Los <a href=\"https:\/\/dutchpeptidelabs.nl\/labresultaten\" target=\"_blank\" rel=\"noopener\">resultados de laboratorio<\/a> son p\u00fablicos y muestran los cromatogramas de pureza y los datos de integraci\u00f3n de cada lote. Para los investigadores que deseen comprender el control de calidad de p\u00e9ptidos como <a href=\"https:\/\/dutchpeptidelabs.nl\/products\/kpv\" target=\"_blank\" rel=\"noopener\">KPV<\/a>, estos CoA ofrecen un ejemplo concreto de c\u00f3mo se aplica en la pr\u00e1ctica la cuantificaci\u00f3n por HPLC.<\/p>\n<p><em>Este art\u00edculo ofrece informaci\u00f3n cient\u00edfica general sobre el an\u00e1lisis por HPLC. Para la validaci\u00f3n de m\u00e9todos y las aplicaciones reglamentarias, consulta las directrices aplicables (ICH Q2(R1)) y a un qu\u00edmico anal\u00edtico cualificado.<\/em><\/p>\n<h2 id=\"aanbeveling\" tabindex=\"-1\">Recomendado<\/h2>\n<ul>\n<li><a href=\"https:\/\/dutchpeptidelabs.nl\/products\/kpv\" target=\"_blank\" rel=\"noopener\">Comprar el p\u00e9ptido KPV &#8211; Dutch Peptide Labs<\/a><\/li>\n<li><a href=\"https:\/\/dutchpeptidelabs.nl\/es?post_type=product&#038;p=302\" target=\"_blank\" rel=\"noopener\">Comprar KLOW Blend | Dutch Peptide Labs<\/a><\/li>\n<li><a href=\"https:\/\/dutchpeptidelabs.nl\/products\/glow-blend\" target=\"_blank\" rel=\"noopener\">Comprar GLOW Blend | Dutch Peptide Labs<\/a><\/li>\n<li><a href=\"https:\/\/dutchpeptidelabs.nl\/products\/alcoholdoekjes\" target=\"_blank\" rel=\"noopener\">Comprar toallitas con alcohol | Dutch Peptide Labs<\/a><\/li>\n<\/ul>\n<p><a href=\"https:\/\/www.babylovegrowth.ai\" target=\"_blank\" rel=\"noopener\">Art\u00edculo generado por BabyLoveGrowth<\/a><\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Un cromatograma de HPLC es una representaci\u00f3n gr\u00e1fica de la respuesta del detector (eje y, expresada en mAU en la detecci\u00f3n UV) frente al tiempo de eluci\u00f3n o de retenci\u00f3n (eje x, en minutos). De un solo cromatograma se obtienen directamente tres tipos de informaci\u00f3n: la identificaci\u00f3n de un analito a trav\u00e9s de su tiempo [&hellip;]<\/p>\n","protected":false},"author":0,"featured_media":408,"comment_status":"open","ping_status":"open","sticky":false,"template":"","format":"standard","meta":{"_acf_changed":false,"footnotes":""},"categories":[254],"tags":[],"class_list":["post-1054","post","type-post","status-publish","format-standard","has-post-thumbnail","hentry","category-uncategorized-es"],"acf":[],"_links":{"self":[{"href":"https:\/\/dutchpeptidelabs.nl\/es\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/1054","targetHints":{"allow":["GET"]}}],"collection":[{"href":"https:\/\/dutchpeptidelabs.nl\/es\/wp-json\/wp\/v2\/posts"}],"about":[{"href":"https:\/\/dutchpeptidelabs.nl\/es\/wp-json\/wp\/v2\/types\/post"}],"replies":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/dutchpeptidelabs.nl\/es\/wp-json\/wp\/v2\/comments?post=1054"}],"version-history":[{"count":1,"href":"https:\/\/dutchpeptidelabs.nl\/es\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/1054\/revisions"}],"predecessor-version":[{"id":81722,"href":"https:\/\/dutchpeptidelabs.nl\/es\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/1054\/revisions\/81722"}],"wp:featuredmedia":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/dutchpeptidelabs.nl\/es\/wp-json\/wp\/v2\/media\/408"}],"wp:attachment":[{"href":"https:\/\/dutchpeptidelabs.nl\/es\/wp-json\/wp\/v2\/media?parent=1054"}],"wp:term":[{"taxonomy":"category","embeddable":true,"href":"https:\/\/dutchpeptidelabs.nl\/es\/wp-json\/wp\/v2\/categories?post=1054"},{"taxonomy":"post_tag","embeddable":true,"href":"https:\/\/dutchpeptidelabs.nl\/es\/wp-json\/wp\/v2\/tags?post=1054"}],"curies":[{"name":"wp","href":"https:\/\/api.w.org\/{rel}","templated":true}]}}