Tras la s\u00edntesis en fase s\u00f3lida, la escisi\u00f3n, la purificaci\u00f3n por HPLC preparativa y la liofilizaci\u00f3n, un p\u00e9ptido de investigaci\u00f3n rara vez est\u00e1 completamente libre de los productos qu\u00edmicos que hicieron posible el proceso de s\u00edntesis y purificaci\u00f3n. Adem\u00e1s del contenido de agua, que suele determinarse mediante valoraci\u00f3n de Karl Fischer, quedan trazas de los disolventes org\u00e1nicos utilizados durante la s\u00edntesis y el procesado posterior. La cromatograf\u00eda de gases (GC) es la t\u00e9cnica anal\u00edtica con la que los laboratorios identifican y cuantifican estos disolventes residuales, como complemento de la caracterizaci\u00f3n habitual por HPLC y MS.<\/p>\n
En la Fmoc-SPPS, la DMF (dimetilformamida) y la NMP (N-metilpirrolidona) se utilizan como medio de reacci\u00f3n para el acoplamiento, los pasos de lavado y la desprotecci\u00f3n del Fmoc. Tras la escisi\u00f3n de la resina, el p\u00e9ptido bruto contiene a menudo todav\u00eda trazas de diclorometano (DCM), que se utiliza en los lavados de la resina y en algunos protocolos de escisi\u00f3n, y de \u00e1cido trifluoroac\u00e9tico (TFA) procedente del propio c\u00f3ctel de escisi\u00f3n. En la posterior purificaci\u00f3n por HPLC preparativa entra en juego el acetonitrilo (ACN) como fase m\u00f3vil. Cada una de estas sustancias puede sobrevivir, en cantidades variables, a la etapa de liofilizaci\u00f3n si no se ha evaporado o intercambiado por completo.<\/p>\n
En qu\u00edmica anal\u00edtica, los disolventes se clasifican a menudo seg\u00fan la directriz ICH Q3C, que distingue tres clases en funci\u00f3n del perfil toxicol\u00f3gico y de los umbrales de notificaci\u00f3n que se derivan de \u00e9l. La DMF y la NMP pertenecen por lo general a la clase 2, al igual que el DCM; el ACN tambi\u00e9n se considera un disolvente de clase 2. Este marco se desarroll\u00f3 principalmente para la industria farmac\u00e9utica, pero los laboratorios que documentan anal\u00edticamente material de investigaci\u00f3n utilizan a menudo la misma clasificaci\u00f3n como punto de referencia para notificar los niveles residuales de forma coherente y compararlos entre lotes. Se trata de un sistema de clasificaci\u00f3n qu\u00edmico-anal\u00edtico con fines de documentaci\u00f3n, no de una afirmaci\u00f3n sobre el uso en personas o animales.<\/p>\n
Para los disolventes residuales vol\u00e1tiles en una muestra s\u00f3lida liofilizada, suele elegirse la GC de espacio de cabeza (headspace). La muestra se lleva a una temperatura fija en un vial cerrado, de modo que los componentes vol\u00e1tiles se distribuyen en la fase gaseosa situada sobre la muestra seg\u00fan su presi\u00f3n de vapor. A continuaci\u00f3n, un volumen definido de esa fase gaseosa se inyecta autom\u00e1ticamente en la columna de GC, donde la separaci\u00f3n se produce en funci\u00f3n de la volatilidad y la polaridad. La detecci\u00f3n se realiza con un detector de ionizaci\u00f3n de llama (FID) para la cuantificaci\u00f3n, o con un espectr\u00f3metro de masas (GC-MS) cuando es necesario identificar picos desconocidos. La inyecci\u00f3n de espacio de cabeza tiene la ventaja de que los componentes no vol\u00e1tiles de la matriz, como el propio p\u00e9ptido, no sobrecargan la columna ni el detector.<\/p>\n
La GC de espacio de cabeza cuantitativa requiere una serie de calibraci\u00f3n con concentraciones conocidas de cada disolvente diana, preparada normalmente en una matriz que se aproxime a la distribuci\u00f3n de equilibrio de la muestra real. Los patrones internos corrigen la variaci\u00f3n del volumen de inyecci\u00f3n y del equilibrado del espacio de cabeza. El l\u00edmite de notificaci\u00f3n (l\u00edmite de cuantificaci\u00f3n) para la mayor\u00eda de los disolventes de clase 2 es del orden de unas decenas a cientos de ppm, muy por debajo de lo que ser\u00eda detectable con un simple an\u00e1lisis por RMN. Esta sensibilidad es relevante porque los disolventes residuales, incluso en peque\u00f1as cantidades, pueden afectar a la exactitud de las determinaciones gravim\u00e9tricas del contenido neto de p\u00e9ptido y, en algunos casos, generar se\u00f1ales interferentes en t\u00e9cnicas anal\u00edticas relacionadas.<\/p>\n
Para los grupos de investigaci\u00f3n que quieren garantizar la reproducibilidad entre experimentos, documentar los disolventes residuales es una parte l\u00f3gica de la huella anal\u00edtica completa de un lote de p\u00e9ptido, junto con la pureza (HPLC), la identidad (MS) y el contenido de agua (Karl Fischer). Al fin y al cabo, la variaci\u00f3n entre lotes de los disolventes residuales puede explicar peque\u00f1as diferencias de comportamiento entre lotes de p\u00e9ptido aparentemente id\u00e9nticos en investigaciones posteriores. Un certificado de an\u00e1lisis completo que indique tambi\u00e9n los valores de disolventes residuales ofrece, por tanto, a los investigadores una imagen m\u00e1s completa del material que tienen entre manos.<\/p>\n
Estos productos y esta informaci\u00f3n est\u00e1n destinados exclusivamente a fines de laboratorio e investigaci\u00f3n, y no al consumo humano ni animal, ni a uso diagn\u00f3stico ni a aplicaci\u00f3n terap\u00e9utica.<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"
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