Lorsque les chercheurs \u00e9valuent la puret\u00e9 d’un peptide, le regard se porte g\u00e9n\u00e9ralement d’embl\u00e9e sur le pourcentage HPLC indiqu\u00e9 sur le certificat d’analyse. Un chiffre tel que \u00ab\u00a0puret\u00e9 de 98\u00a0%\u00a0\u00bb ne dit cependant rien d’une autre forme d’impuret\u00e9, moins visible\u00a0: la pr\u00e9sence de la mauvaise image miroir d’un acide amin\u00e9. Ce ph\u00e9nom\u00e8ne, la chiralit\u00e9, joue un r\u00f4le sous-estim\u00e9 dans la qualit\u00e9 et la reproductibilit\u00e9 des peptides de recherche.<\/p>\n
Les acides amin\u00e9s sont des mol\u00e9cules chirales\u00a0: ils existent sous deux formes images l’une de l’autre dans un miroir, d\u00e9sign\u00e9es configuration L et configuration D. Dans la nature, les prot\u00e9ines et les peptides sont construits presque exclusivement \u00e0 partir d’acides amin\u00e9s L. Ce n’est pas un hasard, mais le r\u00e9sultat de la machinerie de biosynth\u00e8se des cellules, sp\u00e9cifiquement adapt\u00e9e \u00e0 cette configuration. Un acide amin\u00e9 D plac\u00e9 au mauvais endroit dans une s\u00e9quence ne modifie pas fondamentalement le repliement tridimensionnel de la mol\u00e9cule au niveau de la formule brute ou de la masse mol\u00e9culaire, mais bien au niveau de la structure spatiale. Pour les techniques analytiques qui ne mesurent que la masse, comme la spectrom\u00e9trie de masse standard, un acide amin\u00e9 D est invisible\u00a0: il donne exactement la m\u00eame masse que son \u00e9quivalent L.<\/p>\n
En synth\u00e8se peptidique en phase solide, une cha\u00eene est construite acide amin\u00e9 par acide amin\u00e9, chaque \u00e9tape de couplage n\u00e9cessitant une r\u00e9action d’activation. Selon les r\u00e9actifs, la temp\u00e9rature et le temps de r\u00e9action utilis\u00e9s, cette activation peut entra\u00eener une rac\u00e9misation partielle\u00a0: une fraction de l’acide amin\u00e9 L bascule vers la forme D avant que le couplage ne soit termin\u00e9. Les acides amin\u00e9s dont le centre chiral est sensible, comme la cyst\u00e9ine et l’histidine, y sont particuli\u00e8rement sujets. Des s\u00e9quences plus longues et des temp\u00e9ratures de couplage plus \u00e9lev\u00e9es augmentent \u00e9galement la probabilit\u00e9 statistique d’une rac\u00e9misation quelque part dans la cha\u00eene. Le r\u00e9sultat est un lot qui para\u00eet pratiquement identique \u00e0 une r\u00e9f\u00e9rence pure en spectrom\u00e9trie de masse, et m\u00eame en HPLC en phase inverse classique, alors qu’une fraction des mol\u00e9cules pr\u00e9sente un arrangement spatial l\u00e9g\u00e8rement diff\u00e9rent.<\/p>\n
L’HPLC en phase inverse s\u00e9pare les mol\u00e9cules principalement en fonction de leur hydrophobie et de leur polarit\u00e9, et non de leur chiralit\u00e9. Deux diast\u00e9r\u00e9oisom\u00e8res d’un peptide peuvent dans certains cas pr\u00e9senter une diff\u00e9rence de temps de r\u00e9tention tout juste d\u00e9tectable, mais ce n’est pas garanti et cela d\u00e9pend fortement de la position de l’acide amin\u00e9 D dans la s\u00e9quence. Pour \u00e9tablir r\u00e9ellement la puret\u00e9 chirale, des techniques sp\u00e9cifiques sont n\u00e9cessaires\u00a0: HPLC chirale avec une colonne sp\u00e9cialis\u00e9e, chromatographie en phase gazeuse apr\u00e8s d\u00e9rivatisation, ou analyse des acides amin\u00e9s apr\u00e8s hydrolyse compl\u00e8te du peptide suivie d’une s\u00e9paration chirale des \u00e9l\u00e9ments constitutifs individuels. Ces m\u00e9thodes demandent davantage de travail et ne sont donc pas r\u00e9alis\u00e9es en standard sur chaque lot, ce qui signifie qu’un CoA sans donn\u00e9es chirales explicites ne dit rien de cet aspect de la puret\u00e9.<\/p>\n
La litt\u00e9rature scientifique a document\u00e9 \u00e0 plusieurs reprises que la pr\u00e9sence d’acides amin\u00e9s D peut modifier l’interaction avec les r\u00e9cepteurs, la vitesse de d\u00e9gradation enzymatique et la conformation tridimensionnelle d’un peptide, et ainsi influer directement sur les r\u00e9sultats exp\u00e9rimentaux de travaux publi\u00e9s. Pour les laboratoires qui m\u00e8nent des \u00e9tudes comparatives, \u00e9tablissent des relations s\u00e9quence-activit\u00e9 ou comparent des r\u00e9sultats obtenus aupr\u00e8s de diff\u00e9rents fournisseurs, la coh\u00e9rence chirale entre les lots est donc plus pertinente qu’un pourcentage de puret\u00e9 global \u00e9lev\u00e9 \u00e0 lui seul. Deux lots pr\u00e9sentant une puret\u00e9 HPLC identique de 98\u00a0% peuvent, si l’un contient une trace de rac\u00e9misation et l’autre non, donner des r\u00e9sultats diff\u00e9rents lors d’exp\u00e9riences ult\u00e9rieures sans que la cause soit imm\u00e9diatement apparente.<\/p>\n
Les chercheurs qui souhaitent tenir compte de la puret\u00e9 chirale ont int\u00e9r\u00eat \u00e0 se renseigner sur la m\u00e9thode de synth\u00e8se (quels r\u00e9actifs de couplage et quels r\u00e9gimes de temp\u00e9rature ont \u00e9t\u00e9 utilis\u00e9s), sur d’\u00e9ventuelles donn\u00e9es d’HPLC chirale ou d’analyse des acides amin\u00e9s, et \u00e0 demander des certificats sp\u00e9cifiques au lot plut\u00f4t que g\u00e9n\u00e9riques. Les fabricants qui documentent de mani\u00e8re transparente leurs protocoles de synth\u00e8se et de contr\u00f4le qualit\u00e9 donnent aux chercheurs les moyens de prendre explicitement cet aspect en compte lors de l’interpr\u00e9tation des r\u00e9sultats ou de la comparaison des fournisseurs.<\/p>\n
La chiralit\u00e9 illustre ainsi parfaitement le fait que la puret\u00e9 comporte plus de dimensions que ne le laisse supposer un simple pourcentage sur un certificat, et pourquoi la lecture critique de la documentation analytique doit faire partie int\u00e9grante de tout processus de recherche.<\/p>\n
Ces produits et informations sont exclusivement destin\u00e9s \u00e0 des fins de laboratoire et de recherche. Ils ne sont pas destin\u00e9s \u00e0 la consommation humaine ou animale, ni \u00e0 un usage diagnostique ou \u00e0 une application th\u00e9rapeutique.<\/em><\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":" Lorsque les chercheurs \u00e9valuent la puret\u00e9 d’un peptide, le regard se porte g\u00e9n\u00e9ralement d’embl\u00e9e sur le pourcentage HPLC indiqu\u00e9 sur le certificat d’analyse. Un chiffre tel que \u00ab\u00a0puret\u00e9 de 98\u00a0%\u00a0\u00bb ne dit cependant rien d’une autre forme d’impuret\u00e9, moins visible\u00a0: la pr\u00e9sence de la mauvaise image miroir d’un acide amin\u00e9. Ce ph\u00e9nom\u00e8ne, la chiralit\u00e9, joue […]<\/p>\n","protected":false},"author":0,"featured_media":0,"comment_status":"open","ping_status":"open","sticky":false,"template":"","format":"standard","meta":{"_acf_changed":false,"footnotes":""},"categories":[243],"tags":[],"class_list":["post-851","post","type-post","status-publish","format-standard","hentry","category-uncategorized-fr"],"acf":[],"_links":{"self":[{"href":"https:\/\/dutchpeptidelabs.nl\/fr\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/851","targetHints":{"allow":["GET"]}}],"collection":[{"href":"https:\/\/dutchpeptidelabs.nl\/fr\/wp-json\/wp\/v2\/posts"}],"about":[{"href":"https:\/\/dutchpeptidelabs.nl\/fr\/wp-json\/wp\/v2\/types\/post"}],"replies":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/dutchpeptidelabs.nl\/fr\/wp-json\/wp\/v2\/comments?post=851"}],"version-history":[{"count":1,"href":"https:\/\/dutchpeptidelabs.nl\/fr\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/851\/revisions"}],"predecessor-version":[{"id":81808,"href":"https:\/\/dutchpeptidelabs.nl\/fr\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/851\/revisions\/81808"}],"wp:attachment":[{"href":"https:\/\/dutchpeptidelabs.nl\/fr\/wp-json\/wp\/v2\/media?parent=851"}],"wp:term":[{"taxonomy":"category","embeddable":true,"href":"https:\/\/dutchpeptidelabs.nl\/fr\/wp-json\/wp\/v2\/categories?post=851"},{"taxonomy":"post_tag","embeddable":true,"href":"https:\/\/dutchpeptidelabs.nl\/fr\/wp-json\/wp\/v2\/tags?post=851"}],"curies":[{"name":"wp","href":"https:\/\/api.w.org\/{rel}","templated":true}]}}