Dans la synth\u00e8se de peptides de recherche, la formation d’une liaison amide para\u00eet simple sur le papier\u00a0: le groupe acide carboxylique d’un acide amin\u00e9 r\u00e9agit avec le groupe amine du suivant. En pratique, cependant, cette r\u00e9action ne se produit pas d’elle-m\u00eame. Un acide carboxylique libre est trop peu r\u00e9actif pour former une liaison amide spontan\u00e9ment et rapidement, et certainement pas dans les d\u00e9lais qu’exige la synth\u00e8se peptidique en phase solide (SPPS). C’est pourquoi pratiquement tous les protocoles de synth\u00e8se utilisent un r\u00e9actif de couplage. Cet article examine la chimie des r\u00e9actifs les plus utilis\u00e9s, HBTU et HATU, et le r\u00f4le qu’ils jouent dans la limitation des r\u00e9actions secondaires ind\u00e9sirables au cours de la recherche.<\/p>\n
Un acide carboxylique et une amine r\u00e9agissent lentement et avec un faible rendement en l’absence d’activation. Pour rendre la r\u00e9action exploitable en synth\u00e8se, le groupe hydroxyle de l’acide carboxylique est remplac\u00e9 par un meilleur groupe partant. On obtient ainsi un interm\u00e9diaire r\u00e9actif, souvent appel\u00e9 ester activ\u00e9, qui r\u00e9agit rapidement et efficacement avec le groupe amine libre du peptide en croissance sur le support solide. Cette \u00e9tape d’activation est au c\u0153ur du cycle de couplage de tout protocole de SPPS et d\u00e9termine dans une large mesure la vitesse et la puret\u00e9 de la synth\u00e8se.<\/p>\n
Les premi\u00e8res m\u00e9thodes d’activation en chimie des peptides utilisaient des carbodiimides tels que le DCC, souvent associ\u00e9s \u00e0 un additif comme le HOBt pour limiter les sous-produits. Cette approche fonctionnait, mais pr\u00e9sentait des inconv\u00e9nients pratiques, notamment une cin\u00e9tique de r\u00e9action lente avec les acides amin\u00e9s st\u00e9riquement encombr\u00e9s et la formation de sous-produits de type ur\u00e9e difficiles \u00e0 \u00e9liminer. Cela a conduit au d\u00e9veloppement des sels d’uronium et d’aminium, dont le HBTU est l’un des plus connus. Ces r\u00e9actifs activent l’acide carboxylique plus rapidement et se pr\u00eatent mieux \u00e0 la synth\u00e8se automatis\u00e9e, ce qui en a fait le standard de fait dans de nombreux laboratoires de recherche.<\/p>\n
HBTU et HATU fonctionnent selon le m\u00eame principe\u00a0: le r\u00e9actif r\u00e9agit avec l’acide carboxylique d\u00e9proton\u00e9 et forme in situ un ester actif, qui est ensuite attaqu\u00e9 par le groupe amine libre. La diff\u00e9rence entre les deux r\u00e9actifs r\u00e9side dans l’additif dont ils d\u00e9rivent. Le HBTU d\u00e9rive du HOBt (1-hydroxybenzotriazole), tandis que le HATU d\u00e9rive de son analogue aza, le HOAt (1-hydroxy-7-azabenzotriazole). L’atome d’azote suppl\u00e9mentaire du HOAt produit un effet intramol\u00e9culaire qui acc\u00e9l\u00e8re le couplage et r\u00e9duit la formation de sous-produits, en particulier avec des s\u00e9quences difficiles comme les acides amin\u00e9s st\u00e9riquement encombr\u00e9s ou ramifi\u00e9s en b\u00eata. Le HATU est donc souvent choisi lorsqu’une s\u00e9quence a montr\u00e9 une faible efficacit\u00e9 de couplage lors de travaux ant\u00e9rieurs.<\/p>\n
Un point important, quelle que soit la m\u00e9thode d’activation, est la rac\u00e9misation\u00a0: la formation du mauvais st\u00e9r\u00e9oisom\u00e8re pendant la r\u00e9action de couplage. Elle se produit g\u00e9n\u00e9ralement par la formation d’un interm\u00e9diaire oxazolone, dans lequel l’atome de carbone alpha peut perdre sa configuration. Les r\u00e9actifs \u00e0 base de HOAt comme le HATU limitent ce processus plus efficacement que les variantes \u00e0 base de HOBt, ce qui est pertinent pour les recherches dans lesquelles la puret\u00e9 chirale du produit final doit \u00eatre contr\u00f4l\u00e9e avec pr\u00e9cision. Le choix de la base joue \u00e9galement un r\u00f4le\u00a0: la DIPEA et la NMM sont les plus utilis\u00e9es pour neutraliser l’acide lib\u00e9r\u00e9, mais un exc\u00e8s de base peut au contraire favoriser la rac\u00e9misation, ce qui explique pourquoi les protocoles prescrivent g\u00e9n\u00e9ralement des rapports d’\u00e9quivalents pr\u00e9cis.<\/p>\n
En pratique, le choix entre HBTU, HATU et d’autres r\u00e9actifs de couplage d\u00e9pend de plusieurs facteurs\u00a0: la difficult\u00e9 de la s\u00e9quence, le temps de r\u00e9action souhait\u00e9, le co\u00fbt par couplage et la sensibilit\u00e9 de la s\u00e9quence \u00e0 la rac\u00e9misation ou \u00e0 l’agr\u00e9gation. Pour les couplages courants d’acides amin\u00e9s non encombr\u00e9s, le HBTU suffit g\u00e9n\u00e9ralement, tandis que le HATU est r\u00e9serv\u00e9 aux \u00e9tapes de couplage critiques ou difficiles. Les groupes de recherche documentent g\u00e9n\u00e9ralement ces choix pour chaque synth\u00e8se, car le choix du r\u00e9actif se r\u00e9percute directement sur la puret\u00e9 et le rendement finaux du peptide de recherche, tels que contr\u00f4l\u00e9s ensuite par HPLC et spectrom\u00e9trie de masse.<\/p>\n
La chimie des r\u00e9actifs de couplage montre pourquoi la synth\u00e8se peptidique, malgr\u00e9 des d\u00e9cennies d’optimisation, exige toujours une connaissance pr\u00e9cise des proc\u00e9d\u00e9s. Pour les chercheurs qui travaillent avec des peptides synth\u00e9tiques, comprendre ce m\u00e9canisme est utile pour reconna\u00eetre les probl\u00e8mes de couplage et documenter les strat\u00e9gies de synth\u00e8se de fa\u00e7on cibl\u00e9e.<\/p>\n
Ces informations sont destin\u00e9es exclusivement \u00e0 des fins de laboratoire et de recherche. Les produits de Dutch Peptide Labs ne sont pas destin\u00e9s \u00e0 la consommation humaine ou animale, \u00e0 un usage diagnostique ni \u00e0 une application th\u00e9rapeutique.<\/em><\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":" Dans la synth\u00e8se de peptides de recherche, la formation d’une liaison amide para\u00eet simple sur le papier\u00a0: le groupe acide carboxylique d’un acide amin\u00e9 r\u00e9agit avec le groupe amine du suivant. En pratique, cependant, cette r\u00e9action ne se produit pas d’elle-m\u00eame. Un acide carboxylique libre est trop peu r\u00e9actif pour former une liaison amide spontan\u00e9ment […]<\/p>\n","protected":false},"author":0,"featured_media":0,"comment_status":"open","ping_status":"open","sticky":false,"template":"","format":"standard","meta":{"_acf_changed":false,"footnotes":""},"categories":[243],"tags":[],"class_list":["post-876","post","type-post","status-publish","format-standard","hentry","category-uncategorized-fr"],"acf":[],"_links":{"self":[{"href":"https:\/\/dutchpeptidelabs.nl\/fr\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/876","targetHints":{"allow":["GET"]}}],"collection":[{"href":"https:\/\/dutchpeptidelabs.nl\/fr\/wp-json\/wp\/v2\/posts"}],"about":[{"href":"https:\/\/dutchpeptidelabs.nl\/fr\/wp-json\/wp\/v2\/types\/post"}],"replies":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/dutchpeptidelabs.nl\/fr\/wp-json\/wp\/v2\/comments?post=876"}],"version-history":[{"count":1,"href":"https:\/\/dutchpeptidelabs.nl\/fr\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/876\/revisions"}],"predecessor-version":[{"id":81833,"href":"https:\/\/dutchpeptidelabs.nl\/fr\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/876\/revisions\/81833"}],"wp:attachment":[{"href":"https:\/\/dutchpeptidelabs.nl\/fr\/wp-json\/wp\/v2\/media?parent=876"}],"wp:term":[{"taxonomy":"category","embeddable":true,"href":"https:\/\/dutchpeptidelabs.nl\/fr\/wp-json\/wp\/v2\/categories?post=876"},{"taxonomy":"post_tag","embeddable":true,"href":"https:\/\/dutchpeptidelabs.nl\/fr\/wp-json\/wp\/v2\/tags?post=876"}],"curies":[{"name":"wp","href":"https:\/\/api.w.org\/{rel}","templated":true}]}}