Chemia click to zbiorcze okre\u015blenie klasy reakcji chemicznych, kt\u00f3re przebiegaj\u0105 szybko, selektywnie i w \u0142agodnych warunkach, z wysok\u0105 wydajno\u015bci\u0105 i niewielk\u0105 ilo\u015bci\u0105 niepo\u017c\u0105danych produkt\u00f3w ubocznych. Najbardziej znanym wariantem w badaniach peptyd\u00f3w jest cykloaddycja azydek-alkin: grupa azydkowa i grupa alkinowa reaguj\u0105 ze sob\u0105, tworz\u0105c stabilny pier\u015bcie\u0144 triazolowy. Dla laboratori\u00f3w pracuj\u0105cych z peptydami badawczymi jest to atrakcyjne, poniewa\u017c reakcja jest niewra\u017cliwa na wi\u0119kszo\u015b\u0107 grup funkcyjnych obecnych ju\u017c w peptydzie, takich jak aminy, kwasy karboksylowe i tiole. Dzi\u0119ki temu mo\u017cna przy\u0142\u0105czy\u0107 znacznik, sond\u0119 lub powierzchni\u0119 bez zaburzania reszty struktury peptydu.<\/p>\n
W obr\u0119bie cykloaddycji azydek-alkin istniej\u0105 dwa g\u0142\u00f3wne warianty. Wersja katalizowana miedzi\u0105 (CuAAC, Cu(I)-catalyzed azide-alkyne cycloaddition) jest szybka i niedroga, ale pozosta\u0142o\u015bci miedzi mog\u0105 uszkadza\u0107 peptydy w procesach oksydacyjnych i trudno je ca\u0142kowicie usun\u0105\u0107 \u2013 co jest istotne dla p\u00f3\u017aniejszej kontroli analitycznej. Wariant bez miedzi (SPAAC, strain-promoted azide-alkyne cycloaddition) wykorzystuje zamiast katalizatora napr\u0119\u017cony pier\u015bcieniowo cyklooktyn. Reakcja ta przebiega wolniej, ale ca\u0142kowicie eliminuje zanieczyszczenie metalami, co ma znaczenie, gdy pr\u00f3bka badawcza jest nast\u0119pnie analizowana czu\u0142ymi metodami detekcji, takimi jak spektrometria mas. W praktyce wyb\u00f3r mi\u0119dzy tymi wariantami zale\u017cy od wymaganej szybko\u015bci reakcji, dost\u0119pnych odczynnik\u00f3w i tolerancji dalszych bada\u0144 na \u015blady metali.<\/p>\n
Aby zastosowa\u0107 chemi\u0119 click, jedna z dw\u00f3ch grup reaktywnych musi najpierw zosta\u0107 wprowadzona do peptydu badawczego. Zwykle odbywa si\u0119 to na jeden z dw\u00f3ch sposob\u00f3w. Podczas syntezy Fmoc na fazie sta\u0142ej mo\u017cna w wybranym wcze\u015bniej miejscu sekwencji wbudowa\u0107 nienaturalny aminokwas z \u0142a\u0144cuchem bocznym zawieraj\u0105cym grup\u0119 azydkow\u0105 lub alkinow\u0105, co daje pe\u0142n\u0105 kontrol\u0119 nad po\u0142o\u017ceniem grupy reaktywnej. Alternatywnie istniej\u0105c\u0105 grup\u0119 funkcyjn\u0105 \u2013 zwykle woln\u0105 amin\u0119 na N-ko\u0144cu lub \u0142a\u0144cuch boczny lizyny \u2013 mo\u017cna po syntezie przekszta\u0142ci\u0107 chemicznie za pomoc\u0105 odczynnika wprowadzaj\u0105cego grup\u0119 azydkow\u0105 lub alkinow\u0105. Obie drogi maj\u0105 konsekwencje dla analizy czysto\u015bci: dodatkowy etap syntezy oznacza zwykle dodatkow\u0105 rund\u0119 oczyszczania metod\u0105 HPLC i kontrolowane potwierdzenie prawid\u0142owej masy przed przeprowadzeniem sprz\u0119gania.<\/p>\n
W kontek\u015bcie laboratoryjnym chemia click s\u0142u\u017cy g\u0142\u00f3wnie do przy\u0142\u0105czania peptyd\u00f3w badawczych do jednostek wykrywalnych lub funkcjonalnych bez wp\u0142ywu na sam\u0105 struktur\u0119 peptydu. Przyk\u0142ady z literatury to przy\u0142\u0105czanie fluoroforu do bada\u0144 obrazowych, mocowanie peptydu do no\u015bnika sta\u0142ego lub powierzchni czujnika w badaniach wi\u0105zania oraz tworzenie koniugat\u00f3w peptyd-polimer w badaniach materia\u0142owych. Poniewa\u017c powsta\u0142y pier\u015bcie\u0144 triazolowy jest chemicznie bardzo stabilny, wi\u0105zanie pozostaje nienaruszone w szerokim zakresie warunk\u00f3w analitycznych i eksperymentalnych, co sprzyja powtarzalno\u015bci.<\/p>\n
Jak w przypadku ka\u017cdej modyfikacji peptydu badawczego, charakterystyka po reakcji jest niezb\u0119dna. LC-MS potwierdza, czy przesuni\u0119cie masy odpowiada oczekiwanemu powstaniu triazolu i czy nadal obecny jest nieprzereagowany materia\u0142 wyj\u015bciowy. Analityczna chromatografia HPLC pokazuje, czy reakcja koniugacji przebieg\u0142a ilo\u015bciowo, czy te\u017c potrzebny jest dodatkowy etap oczyszczania w celu oddzielenia sprz\u0119\u017conego produktu od nieprzekszta\u0142conego peptydu. W przypadku reakcji CuAAC cz\u0119sto sprawdza si\u0119 r\u00f3wnie\u017c obecno\u015b\u0107 \u015bladowych pozosta\u0142o\u015bci miedzi, na przyk\u0142ad metod\u0105 ICP-MS, aby upewni\u0107 si\u0119, \u017ce ko\u0144cowa pr\u00f3bka nadaje si\u0119 do zamierzonych dalszych bada\u0144.<\/p>\n
W ci\u0105gu dwudziestu lat chemia click sta\u0142a si\u0119 standardowym narz\u0119dziem chemii biokoniugacji peptyd\u00f3w, w\u0142a\u015bnie dlatego, \u017ce reakcja jest przewidywalna, selektywna i \u0142atwa do scharakteryzowania. Dla laboratori\u00f3w \u0142\u0105cz\u0105cych peptydy badawcze ze znacznikami, powierzchniami lub innymi jednostkami funkcjonalnymi wyb\u00f3r mi\u0119dzy CuAAC a SPAAC daje bezpo\u015bredni\u0105 mo\u017cliwo\u015b\u0107 wywa\u017cenia szybko\u015bci i czysto\u015bci produktu ko\u0144cowego.<\/p>\n
Dutch Peptide Labs dostarcza peptydy badawcze wy\u0142\u0105cznie do cel\u00f3w laboratoryjnych i badawczych. Nasze produkty i informacje na tej stronie nie s\u0105 przeznaczone do spo\u017cycia przez ludzi ani zwierz\u0119ta, do zastosowa\u0144 diagnostycznych ani terapeutycznych.<\/em><\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":" Co sprawia, \u017ce reakcja nale\u017cy do \u201echemii click\u201d? Chemia click to zbiorcze okre\u015blenie klasy reakcji chemicznych, kt\u00f3re przebiegaj\u0105 szybko, selektywnie i w \u0142agodnych warunkach, z wysok\u0105 wydajno\u015bci\u0105 i niewielk\u0105 ilo\u015bci\u0105 niepo\u017c\u0105danych produkt\u00f3w ubocznych. Najbardziej znanym wariantem w badaniach peptyd\u00f3w jest cykloaddycja azydek-alkin: grupa azydkowa i grupa alkinowa reaguj\u0105 ze sob\u0105, tworz\u0105c stabilny pier\u015bcie\u0144 triazolowy. Dla […]<\/p>\n","protected":false},"author":0,"featured_media":0,"comment_status":"open","ping_status":"open","sticky":false,"template":"","format":"standard","meta":{"_acf_changed":false,"footnotes":""},"categories":[265],"tags":[],"class_list":["post-1393","post","type-post","status-publish","format-standard","hentry","category-uncategorized-pl"],"acf":[],"_links":{"self":[{"href":"https:\/\/dutchpeptidelabs.nl\/pl\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/1393","targetHints":{"allow":["GET"]}}],"collection":[{"href":"https:\/\/dutchpeptidelabs.nl\/pl\/wp-json\/wp\/v2\/posts"}],"about":[{"href":"https:\/\/dutchpeptidelabs.nl\/pl\/wp-json\/wp\/v2\/types\/post"}],"replies":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/dutchpeptidelabs.nl\/pl\/wp-json\/wp\/v2\/comments?post=1393"}],"version-history":[{"count":1,"href":"https:\/\/dutchpeptidelabs.nl\/pl\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/1393\/revisions"}],"predecessor-version":[{"id":81936,"href":"https:\/\/dutchpeptidelabs.nl\/pl\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/1393\/revisions\/81936"}],"wp:attachment":[{"href":"https:\/\/dutchpeptidelabs.nl\/pl\/wp-json\/wp\/v2\/media?parent=1393"}],"wp:term":[{"taxonomy":"category","embeddable":true,"href":"https:\/\/dutchpeptidelabs.nl\/pl\/wp-json\/wp\/v2\/categories?post=1393"},{"taxonomy":"post_tag","embeddable":true,"href":"https:\/\/dutchpeptidelabs.nl\/pl\/wp-json\/wp\/v2\/tags?post=1393"}],"curies":[{"name":"wp","href":"https:\/\/api.w.org\/{rel}","templated":true}]}}