Po syntezie na fazie sta\u0142ej, odszczepieniu, oczyszczaniu metod\u0105 preparatywnej HPLC i liofilizacji peptyd badawczy rzadko jest ca\u0142kowicie wolny od substancji chemicznych, kt\u00f3re umo\u017cliwi\u0142y proces syntezy i oczyszczania. Opr\u00f3cz zawarto\u015bci wody, oznaczanej zwykle metod\u0105 miareczkowania Karla Fischera, pozostaj\u0105 \u015bladowe ilo\u015bci rozpuszczalnik\u00f3w organicznych u\u017cytych podczas syntezy i obr\u00f3bki. Chromatografia gazowa (GC) to technika analityczna, za pomoc\u0105 kt\u00f3rej laboratoria identyfikuj\u0105 i oznaczaj\u0105 ilo\u015bciowo te rozpuszczalniki resztkowe, jako uzupe\u0142nienie typowej charakterystyki metodami HPLC i MS.<\/p>\n
W syntezie Fmoc SPPS jako \u015brodowisko reakcji do sprz\u0119gania, etap\u00f3w przemywania i usuwania grupy Fmoc stosuje si\u0119 DMF (dimetyloformamid) i NMP (N-metylopirolidon). Po odszczepieniu od \u017cywicy surowy peptyd cz\u0119sto zawiera jeszcze \u015bladowe ilo\u015bci dichlorometanu (DCM), u\u017cywanego do przemywania \u017cywicy i w niekt\u00f3rych protoko\u0142ach odszczepiania, oraz kwasu trifluorooctowego (TFA) pochodz\u0105cego z samej mieszaniny odszczepiaj\u0105cej. W kolejnym etapie oczyszczania metod\u0105 preparatywnej HPLC jako faza ruchoma pojawia si\u0119 acetonitryl (ACN). Ka\u017cda z tych substancji mo\u017ce w zmiennych ilo\u015bciach przetrwa\u0107 etap liofilizacji, je\u015bli nie zosta\u0142a ca\u0142kowicie odparowana lub wymieniona.<\/p>\n
W chemii analitycznej rozpuszczalniki klasyfikuje si\u0119 cz\u0119sto zgodnie z wytyczn\u0105 ICH Q3C, kt\u00f3ra wyr\u00f3\u017cnia trzy klasy na podstawie profilu toksykologicznego i wynikaj\u0105cych z niego prog\u00f3w raportowania. DMF i NMP nale\u017c\u0105 na og\u00f3\u0142 do klasy 2, podobnie jak DCM; ACN r\u00f3wnie\u017c uznaje si\u0119 za rozpuszczalnik klasy 2. Ramy te opracowano przede wszystkim dla przemys\u0142u farmaceutycznego, ale laboratoria dokumentuj\u0105ce analitycznie materia\u0142 badawczy cz\u0119sto stosuj\u0105 t\u0119 sam\u0105 klasyfikacj\u0119 jako punkt odniesienia, aby sp\u00f3jnie raportowa\u0107 poziomy pozosta\u0142o\u015bci i por\u00f3wnywa\u0107 je mi\u0119dzy partiami. Jest to analityczno-chemiczny system klasyfikacji do cel\u00f3w dokumentacyjnych, a nie stwierdzenie dotycz\u0105ce stosowania u ludzi lub zwierz\u0105t.<\/p>\n
W przypadku lotnych rozpuszczalnik\u00f3w resztkowych w sta\u0142ej, liofilizowanej pr\u00f3bce wybiera si\u0119 zwykle technik\u0119 GC z analiz\u0105 fazy nadpowierzchniowej (headspace GC). Pr\u00f3bk\u0119 doprowadza si\u0119 do ustalonej temperatury w szczelnie zamkni\u0119tej fiolce, tak aby lotne sk\u0142adniki rozdzieli\u0142y si\u0119 do fazy gazowej nad pr\u00f3bk\u0105 zgodnie z ich pr\u0119\u017cno\u015bci\u0105 par. Okre\u015blon\u0105 obj\u0119to\u015b\u0107 tej fazy gazowej wprowadza si\u0119 nast\u0119pnie automatycznie na kolumn\u0119 GC, gdzie zachodzi rozdzia\u0142 na podstawie lotno\u015bci i polarno\u015bci. Detekcj\u0119 prowadzi si\u0119 detektorem p\u0142omieniowo-jonizacyjnym (FID) do oznacze\u0144 ilo\u015bciowych lub spektrometrem mas (GC-MS), gdy potrzebna jest identyfikacja nieznanych pik\u00f3w. Dozowanie z fazy nadpowierzchniowej ma t\u0119 zalet\u0119, \u017ce nielotne sk\u0142adniki matrycy, takie jak sam peptyd, nie obci\u0105\u017caj\u0105 kolumny ani detektora.<\/p>\n
Ilo\u015bciowa analiza GC fazy nadpowierzchniowej wymaga serii kalibracyjnej o znanych st\u0119\u017ceniach ka\u017cdego oznaczanego rozpuszczalnika, przygotowywanej zwykle w matrycy zbli\u017conej do rozk\u0142adu r\u00f3wnowagowego rzeczywistej pr\u00f3bki. Wzorce wewn\u0119trzne koryguj\u0105 zmienno\u015b\u0107 obj\u0119to\u015bci dozowania i r\u00f3wnowa\u017cenia fazy nadpowierzchniowej. Granica raportowania (granica oznaczalno\u015bci) dla wi\u0119kszo\u015bci rozpuszczalnik\u00f3w klasy 2 jest rz\u0119du kilkudziesi\u0119ciu do kilkuset ppm, czyli znacznie poni\u017cej tego, co by\u0142oby wykrywalne prost\u0105 analiz\u0105 NMR. Ta czu\u0142o\u015b\u0107 ma znaczenie, poniewa\u017c rozpuszczalniki resztkowe, nawet w niewielkich ilo\u015bciach, mog\u0105 wp\u0142ywa\u0107 na dok\u0142adno\u015b\u0107 grawimetrycznych oznacze\u0144 zawarto\u015bci peptydu netto, a w niekt\u00f3rych przypadkach dawa\u0107 sygna\u0142y zak\u0142\u00f3caj\u0105ce w pokrewnych technikach analitycznych.<\/p>\n
Dla grup badawczych, kt\u00f3re chc\u0105 zapewni\u0107 powtarzalno\u015b\u0107 mi\u0119dzy eksperymentami, dokumentowanie rozpuszczalnik\u00f3w resztkowych jest logiczn\u0105 cz\u0119\u015bci\u0105 pe\u0142nego analitycznego \u201eodcisku palca\u201d partii peptydu, obok czysto\u015bci (HPLC), to\u017csamo\u015bci (MS) i zawarto\u015bci wody (metoda Karla Fischera). Zmienno\u015b\u0107 zawarto\u015bci rozpuszczalnik\u00f3w resztkowych mi\u0119dzy partiami mo\u017ce bowiem t\u0142umaczy\u0107 niewielkie r\u00f3\u017cnice w zachowaniu pozornie identycznych partii peptydu w dalszych badaniach. Kompletny certyfikat analizy, kt\u00f3ry podaje r\u00f3wnie\u017c warto\u015bci rozpuszczalnik\u00f3w resztkowych, daje zatem badaczom pe\u0142niejszy obraz materia\u0142u, kt\u00f3rym dysponuj\u0105.<\/p>\n
Te produkty i informacje s\u0105 przeznaczone wy\u0142\u0105cznie do cel\u00f3w laboratoryjnych i badawczych, a nie do spo\u017cycia przez ludzi ani zwierz\u0119ta, do cel\u00f3w diagnostycznych ani do zastosowa\u0144 terapeutycznych.<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"
Po syntezie na fazie sta\u0142ej, odszczepieniu, oczyszczaniu metod\u0105 preparatywnej HPLC i liofilizacji peptyd badawczy rzadko jest ca\u0142kowicie wolny od substancji chemicznych, kt\u00f3re umo\u017cliwi\u0142y proces syntezy i oczyszczania. Opr\u00f3cz zawarto\u015bci wody, oznaczanej zwykle metod\u0105 miareczkowania Karla Fischera, pozostaj\u0105 \u015bladowe ilo\u015bci rozpuszczalnik\u00f3w organicznych u\u017cytych podczas syntezy i obr\u00f3bki. Chromatografia gazowa (GC) to technika analityczna, za pomoc\u0105 kt\u00f3rej […]<\/p>\n","protected":false},"author":0,"featured_media":0,"comment_status":"open","ping_status":"open","sticky":false,"template":"","format":"standard","meta":{"_acf_changed":false,"footnotes":""},"categories":[265],"tags":[],"class_list":["post-1411","post","type-post","status-publish","format-standard","hentry","category-uncategorized-pl"],"acf":[],"_links":{"self":[{"href":"https:\/\/dutchpeptidelabs.nl\/pl\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/1411","targetHints":{"allow":["GET"]}}],"collection":[{"href":"https:\/\/dutchpeptidelabs.nl\/pl\/wp-json\/wp\/v2\/posts"}],"about":[{"href":"https:\/\/dutchpeptidelabs.nl\/pl\/wp-json\/wp\/v2\/types\/post"}],"replies":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/dutchpeptidelabs.nl\/pl\/wp-json\/wp\/v2\/comments?post=1411"}],"version-history":[{"count":1,"href":"https:\/\/dutchpeptidelabs.nl\/pl\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/1411\/revisions"}],"predecessor-version":[{"id":81960,"href":"https:\/\/dutchpeptidelabs.nl\/pl\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/1411\/revisions\/81960"}],"wp:attachment":[{"href":"https:\/\/dutchpeptidelabs.nl\/pl\/wp-json\/wp\/v2\/media?parent=1411"}],"wp:term":[{"taxonomy":"category","embeddable":true,"href":"https:\/\/dutchpeptidelabs.nl\/pl\/wp-json\/wp\/v2\/categories?post=1411"},{"taxonomy":"post_tag","embeddable":true,"href":"https:\/\/dutchpeptidelabs.nl\/pl\/wp-json\/wp\/v2\/tags?post=1411"}],"curies":[{"name":"wp","href":"https:\/\/api.w.org\/{rel}","templated":true}]}}