Wissenswertes über Peptide
Forschung, Protokolle und Neuigkeiten zu Peptiden für die wissenschaftliche Verwendung.
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Click-Chemie in der Peptidforschung: Azid-Alkin-Cycloaddition für die gezielte Biokonjugation
Was macht eine Reaktion zur „Click-Chemie“? Click-Chemie ist ein Sammelbegriff für eine Klasse chemischer Reaktionen, die schnell, selektiv und unter milden Bedingungen ablaufen, mit hoher Ausbeute und wenigen unerwünschten Nebenprodukten. Die bekannteste...
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Peptide Mapping von Forschungspeptiden: enzymatische Verdauung und LC-MS/MS zur Sequenzbestätigung
Eine Bestimmung der intakten Masse per LC-MS bestätigt, dass ein Forschungspeptid das richtige Molekulargewicht hat, sagt aber wenig über die genaue Reihenfolge der darin enthaltenen Aminosäuren aus. Zwei Peptide mit identischer Masse...
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Grüne Lösungsmittel in der SPPS: Warum DMF unter Druck steht und welche Alternativen es gibt
Dimethylformamid (DMF) ist seit Jahrzehnten das Standardlösungsmittel in der Fmoc-basierten Festphasenpeptidsynthese (SPPS): Es lässt Polystyrol- und PEG-Harze gut quellen, löst geschützte Aminosäuren und Kupplungsreagenzien bereitwillig und ist mit praktisch jedem Syntheseprotokoll kompatibel....
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Restlösungsmittel in Forschungspeptiden: Was die GC-Analyse nach der Lyophilisation offenlegt
Nach Festphasensynthese, Abspaltung, präparativer HPLC-Aufreinigung und Lyophilisation ist ein Forschungspeptid selten vollständig frei von den Chemikalien, die den Synthese- und Aufreinigungsprozess möglich gemacht haben. Neben dem Wassergehalt, der üblicherweise per Karl-Fischer-Titration bestimmt...
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Stapled Peptides: wie eine Kohlenwasserstoff-„Klammer“ Sekundärstruktur und Proteaseresistenz in der Forschung verbessert
Lineare Peptide haben ein strukturelles Problem: Außerhalb eines gefalteten Proteins verlieren kurze α-helikale Sequenzen ihre Form, sobald sie in Lösung gehen. Für Forschende, die eine bestimmte Helix untersuchen möchten – etwa um...
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Stabilisotopenmarkierte Peptide: interne Standards für die quantitative LC-MS/MS
Die quantitative Massenspektrometrie spielt in der peptidbezogenen Forschung eine immer größere Rolle, von Proteomik-Studien bis zur Charakterisierung synthetischer Forschungspeptide. Ein LC-MS/MS-Signal ist für sich genommen jedoch kein zuverlässiges Maß für die Konzentration:...
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Disulfidbrücken in Forschungspeptiden mit mehreren Cysteinen: oxidative Faltung und regioselektive Strategien
Viele bioaktive Forschungspeptide verdanken ihre dreidimensionale Struktur nicht nur ihrer Aminosäuresequenz, sondern auch einer oder mehreren Disulfidbrücken zwischen Cysteinresten. Bei Peptiden mit nur einem einzigen Cysteinpaar lässt sich die Bildung dieser Brücke...
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Native chemische Ligation: Jenseits der Längenbegrenzung der SPPS
Warum die SPPS nicht unbegrenzt skaliert Die Festphasenpeptidsynthese (SPPS) ist die Standardmethode, um Forschungspeptide Rest für Rest auf einem festen Harzträger aufzubauen. Frühere Artikel in diesem Blog behandelten die Bausteine dieses Prozesses:...
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Rest-TFA nach dem Gegenionenaustausch: was die Ionenchromatographie zeigt
Warum Rest-TFA von Bedeutung ist Trifluoressigsäure (TFA) ist bei der präparativen HPLC-Aufreinigung von Forschungspeptiden unverzichtbar: Sie wirkt als Ionenpaarreagenz und sorgt während der Aufreinigung für scharfe, gut getrennte Peaks. Nach dem Gegenionenaustausch...
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Kapillarelektrophorese als orthogonale Technik neben der RP-HPLC bei Forschungspeptiden
Wenn ein Forschungspeptid die präparative HPLC-Aufreinigung und den Gegenionenaustausch durchlaufen hat, bleibt eine entscheidende Frage offen: Stimmt der angegebene Reinheitswert tatsächlich? Die RP-HPLC ist der Industriestandard, doch keine Trenntechnik ist unfehlbar. Die...
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Von der reinen Fraktion zum Endprodukt: Poolen und Gegenionenaustausch nach der präparativen HPLC
Die präparative HPLC liefert eine Reihe von Fraktionen, jede mit ihrem eigenen Reinheitsprofil. Doch die Fraktion, die aus dem Fraktionssammler kommt, ist noch kein Endprodukt. Zwischen „reinem Peak“ und „dokumentiertem Forschungspeptid in...
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Präparative HPLC-Aufreinigung von Forschungspeptiden: vom Rohgemisch zur reinen Fraktion
Nach dem Abspaltschritt liegt kein reines Forschungspeptid auf der Laborbank, sondern ein komplexes Rohgemisch. Der vorige Artikel dieser Reihe behandelte, wie Scavenger während der TFA-Abspaltung verhindern, dass reaktive Carbokationen das Peptid schädigen....
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